Отслеживание диссеминации клеток меланомы в здоровых тканях (DISSEMELA)

В западном мире заболеваемость меланомой постоянно росла в течение последних 50 лет, и в настоящее время она считается наиболее частой опухолью у женщин в возрасте 20–29 лет. Гены BRAF, NRAS и c-kit играют важную роль в пролиферации клеток и очень часто мутируют при меланоме. Несмотря на недавние терапевтические прорывы, достигнутые с использованием новых препаратов, метастатическая меланома по-прежнему остается опасным для жизни заболеванием. Один из основных вопросов меланомы касается начальных шагов, ведущих к метастатическому распространению, лучшее понимание является ключевым шагом к ее предотвращению, а выявление новых молекулярных механизмов необходимо для улучшения нашего терапевтического арсенала.

Предлагаемая работа направлена ​​на изучение гипотезы раннего распространения меланомы человека с использованием недавно разработанных мощных методов ПЦР на льду, а также классической иммуногистохимии. Для этого исследователи воспользуются тем фактом, что лечение меланомы основано на вторичном иссечении нормальной перитуморальной кожи и сторожевого лимфатического узла. Эта перитуморальная ткань имеет большие размеры (диаметром от 2 до 6 см), содержит лимфатические сосуды в гиподерме, ткань, которая считается местом метастатического пути меланоцитов, и остается частично доступной для анализа.

Будут обнаружены все пациенты с меланомой стадии Ib и II, наблюдаемые в парижской когорте Melan-cohort, Cochin Hospital и Gustave Roussy Institute, включенных в период с 2005 по 2009 год. Анализ ПЦР будет проводиться на ДНК, выделенной из залитых парафином срезов первичных опухолей. Будут отобраны пациенты с мутациями в генах BRAF (BRAFV600E, BRAFV600K), NRAS (кодон 61) или c-kit. Будут получены архивные ткани, залитые парафином, из здоровой кожи вокруг поражений, а также из здоровых сигнальных лимфатических узлов. Пиросеквенирование и электронная ПЦР на льду, направленные на мутации вышеуказанных генов в их обычных положениях, будут проводиться на ДНК, извлеченной из этих образцов. Иммунофлуоресценция против BRAFV600E или против опухолевых/инициирующих/стволовых клеток будет проводиться на тех же тканях. Эти простые методы позволят проверить, используя чувствительный инструмент молекулярной биологии, есть ли у людей с меланомами раннее распространение клеток меланомы в гистопатологически здоровых сигнальных лимфатических узлах и околоопухолевой коже. Присутствие этих клональных клеток в этих здоровых тканях будет коррелировать с выживаемостью пациентов через 5 лет и позволит разработать новые терапевтические методы наблюдения и стратегии.