Rastreamento da Disseminação de Células de Melanoma em Tecidos Saudáveis (DISSEMELA)

No mundo ocidental, a incidência de melanoma aumentou constantemente nos últimos 50 anos, e atualmente é relatado como o tumor mais frequente em mulheres de 20 a 29 anos. Os genes BRAF, NRAS e c-kit desempenham um papel importante na proliferação celular e são mutados com frequência muito alta no melanoma. Apesar dos recentes avanços terapêuticos obtidos com o uso de novas drogas, o melanoma metastático continua sendo uma doença com risco de vida. Uma das principais questões no melanoma diz respeito aos passos iniciais que levam à disseminação metastática, sendo o seu melhor conhecimento um passo fundamental para a sua prevenção e a identificação de novos mecanismos moleculares sendo implementáveis ​​para a melhoria do nosso arsenal terapêutico.

O trabalho proposto tem como objetivo estudar a hipótese de disseminação precoce em melanoma humano usando as poderosas técnicas recentemente desenvolvidas de e-ice cold PCR, bem como a imuno-histoquímica clássica. Para fazer isso, os investigadores aproveitarão o fato de que o tratamento do melanoma depende de uma excisão secundária da pele peritumoral normal e do linfonodo sentinela. Esse tecido peritumoral é grande (medindo de 2 a 6 cm de diâmetro), contém linfáticos na hipoderme, tecido considerado hospedeiro da via metastática dos melanócitos e permanece parcialmente disponível para análise.

Serão encontrados todos os pacientes com melanoma estágio Ib e II acompanhados na coorte parisiense Melan-cohort, Cochin Hospital e Gustave Roussy Institute incluídos entre 2005 e 2009. Uma análise de PCR será feita em DNA extraído de seções embebidas em parafina de tumores primários. Serão selecionados pacientes que apresentem mutações nos genes BRAF (BRAFV600E, BRAFV600K), NRAS (códon 61) ou c-kit. Os tecidos embebidos em parafina de arquivo de pele perilesional saudável, bem como de gânglios linfáticos sentinela saudáveis ​​serão obtidos. Pyrosequencing e e-ice cold PCR visando as mutações dos genes acima em suas posições usuais serão feitos no DNA extraído dessas amostras. A imunofluorescência anti-BRAFV600E ou células anti-tumorais/iniciadoras/tronco será realizada nos mesmos tecidos. Estas técnicas simples testarão -usando uma ferramenta de biologia molecular sensível- se em humanos com melanomas, há disseminação precoce de células de melanoma em linfonodo sentinela histopatológico saudável e pele peritumoral. A presença dessas células clonais nesses tecidos saudáveis ​​será correlacionada com a sobrevida dos pacientes após 5 anos e permitirá o desenvolvimento de novos seguimentos e estratégias terapêuticas.