Tracciamento Diffusione di cellule di melanoma nei tessuti sani (DISSEMELA)

Nel mondo occidentale, l'incidenza del melanoma è costantemente aumentata negli ultimi 50 anni, ed è attualmente segnalato come il tumore più frequente nelle donne di età compresa tra 20 e 29 anni. I geni BRAF, NRAS e c-kit svolgono un ruolo importante nella proliferazione cellulare e sono mutati ad altissima frequenza nel melanoma. Nonostante i recenti progressi terapeutici ottenuti con l'uso di nuovi farmaci, il melanoma metastatico rimane ancora una malattia potenzialmente letale. Una delle domande principali nel melanoma riguarda i passaggi iniziali che portano alla diffusione metastatica, una migliore comprensione è un passaggio chiave per la sua prevenzione e l'identificazione di nuovi meccanismi molecolari implementativi per il miglioramento del nostro arsenale terapeutico.

Il lavoro proposto mira a studiare l'ipotesi di una diffusione precoce nel melanoma umano utilizzando le potenti tecniche recentemente sviluppate di e-ice cold PCR, nonché l'immunoistochimica classica. Per fare ciò, i ricercatori trarranno vantaggio dal fatto che il trattamento del melanoma si basa su un'escissione secondaria della normale pelle peritumorale e del linfonodo sentinella. Questo tessuto peritumorale è grande (misura da 2 a 6 cm di diametro), contiene linfatici nell'ipoderma, il tessuto considerato per ospitare la via metastatica dei melanociti e rimane parzialmente disponibile per l'analisi.

Verranno trovati tutti i pazienti con melanoma in stadio Ib e II seguiti nella coorte parigina Melan-cohort, Cochin Hospital e Gustave Roussy Institute inclusi tra il 2005 e il 2009. Verrà eseguita un'analisi PCR su DNA estratto da sezioni incluse in paraffina di tumori primari. Saranno selezionati i pazienti che presentano mutazioni nei geni BRAF (BRAFV600E, BRAFV600K), NRAS (codone 61) o c-kit. Saranno ottenuti i tessuti d'archivio inclusi in paraffina da cute perilesionale sana e da linfonodi sentinella sani. Il pirosequenziamento e l'e-ice cold PCR mirano alle mutazioni dei suddetti geni nelle loro posizioni abituali sul DNA estratto da questi campioni. L'immunofluorescenza anti-BRAFV600E o antitumorale/iniziante/cellule staminali sarà effettuata sugli stessi tessuti. Queste semplici tecniche verificheranno, utilizzando uno strumento di biologia molecolare sensibile, se negli esseri umani con melanomi, vi è una diffusione precoce delle cellule di melanoma nel linfonodo sentinella sano istopatologico e nella pelle peritumorale. La presenza di queste cellule clonali in questi tessuti sani sarà correlata alla sopravvivenza dei pazienti dopo 5 anni e consentirà lo sviluppo di nuove strategie e follow-up terapeutici.