A melanoma sejtek terjedésének nyomon követése az egészséges szövetekben (DISSEMELA)

A nyugati világban a melanoma incidenciája folyamatosan emelkedett az elmúlt 50 évben, és jelenleg ez a leggyakoribb daganat a 20-29 éves nők körében. A BRAF, NRAS és c-kit gének fontos szerepet játszanak a sejtproliferációban, és nagyon nagy gyakorisággal mutálódnak melanomában. Az új gyógyszerek alkalmazásával a közelmúltban elért terápiás áttörések ellenére a metasztatikus melanoma továbbra is életveszélyes betegség. A melanoma egyik fő kérdése a metasztatikus terjedéshez vezető kezdeti lépésekre vonatkozik, amelyek jobb megértése kulcsfontosságú lépés a megelőzésben, valamint új molekuláris mechanizmusok azonosítása, amelyek terápiás arzenálunk fejlesztéséhez szükségesek.

A javasolt munka célja a humán melanóma korai terjedésének hipotézise tanulmányozása a közelmúltban kifejlesztett hatékony e-jéghideg PCR technikák, valamint a klasszikus immunhisztokémia felhasználásával. Ennek érdekében a kutatók kihasználják azt a tényt, hogy a melanoma kezelése a normál peritumorális bőr és az őrnyirokcsomó másodlagos kivágásán alapul. Ez a peritumorális szövet nagy (2-6 cm átmérőjű), nyirokcsomókat tartalmaz a hypodermisben, amely szövet a melanociták metasztatikus útvonalának otthont ad, és részben elérhető marad az elemzéshez.

A 2005 és 2009 között a párizsi Melan-kohorszban, a Cochin Kórházban és a Gustave Roussy Intézetben megfigyelt összes Ib és II stádiumú melanomában szenvedő beteg megtalálható. Az elsődleges daganatok paraffinba ágyazott metszeteiből kivont DNS-en PCR-elemzést végeznek. A BRAF (BRAFV600E, BRAFV600K), NRAS (61-es kodon) vagy c-kit génekben mutációkat mutató betegeket kiválasztják. Az archivális paraffinba ágyazott szöveteket az egészséges perilesionális bőrből, valamint az egészséges őrnyirokcsomókból nyerik. A piroszekvenálást és az e-jéghideg PCR-t, amely a fenti gének mutációit célozza meg azok szokásos helyén, az ezekből a mintákból kivont DNS-en végezzük el. Immunfluoreszcens anti-BRAFV600E vagy tumorellenes/kezdeményező/őssejteket ugyanazon szöveteken végeznek. Ezek az egyszerű technikák – egy érzékeny molekuláris biológiai eszköz segítségével – megvizsgálják, hogy a melanómás embereknél előfordul-e a melanomasejtek korai szétterjedése a hisztopatológiailag egészséges őrnyirokcsomóban és a peritumorális bőrben. Ezeknek a klonális sejteknek a jelenléte ezekben az egészséges szövetekben összefügg a betegek túlélésével 5 év után, és lehetővé teszi új terápiás nyomon követés és stratégiák kidolgozását.