Śledzenie rozprzestrzeniania się komórek czerniaka w zdrowych tkankach (DISSEMELA)

W świecie zachodnim zachorowalność na czerniaka stale wzrastała przez ostatnie 50 lat i jest obecnie wymieniana jako najczęstszy nowotwór u kobiet w wieku 20-29 lat. Geny BRAF, NRAS i c-kit odgrywają ważną rolę w proliferacji komórek i są mutowane z bardzo dużą częstotliwością w czerniaku. Pomimo ostatnich przełomów terapeutycznych uzyskanych dzięki zastosowaniu nowych leków, czerniak przerzutowy nadal pozostaje chorobą zagrażającą życiu. Jedno z głównych pytań dotyczących czerniaka dotyczy początkowych kroków prowadzących do rozprzestrzeniania się przerzutów, lepszego zrozumienia będącego kluczowym krokiem do jego zapobiegania oraz identyfikacji nowych mechanizmów molekularnych, które są wdrażane do doskonalenia naszego arsenału terapeutycznego.

Proponowana praca ma na celu zbadanie hipotezy wczesnego rozprzestrzeniania się czerniaka ludzkiego przy użyciu niedawno opracowanych potężnych technik e-zimnego PCR, a także klasycznej immunohistochemii. W tym celu badacze wykorzystają fakt, że leczenie czerniaka polega na wtórnym wycięciu normalnej skóry okołoguzowej i wartowniczego węzła chłonnego. Ta tkanka okołoguzowa jest duża (o średnicy od 2 do 6 cm), zawiera naczynia limfatyczne w tkance podskórnej, tkance uważanej za gospodarza przerzutowej drogi melanocytów i pozostaje częściowo dostępna do analizy.

Zostaną znalezieni wszyscy pacjenci z czerniakiem w stadium Ib i II obserwowani w paryskiej kohorcie Melan-cohort, Cochin Hospital i Gustave Roussy Institute w latach 2005-2009. Analiza PCR zostanie przeprowadzona na DNA wyekstrahowanym z zatopionych w parafinie skrawków guzów pierwotnych. Wybrani zostaną pacjenci z mutacjami w genach BRAF (BRAFV600E, BRAFV600K), NRAS (kodon 61) lub c-kit. Pobrane zostaną archiwalne tkanki zatopione w parafinie ze zdrowej skóry wokół zmian skórnych oraz ze zdrowych wartowniczych węzłów chłonnych. Pirosekwencjonowanie i e-zimny PCR ukierunkowany na mutacje powyższych genów w ich zwykłych pozycjach zostaną przeprowadzone na DNA wyekstrahowanym z tych próbek. Immunofluorescencyjne anty-BRAFV600E lub komórki przeciwnowotworowe/inicjujące/macierzyste zostaną wykonane na tych samych tkankach. Te proste techniki pozwolą przetestować - przy użyciu czułego narzędzia biologii molekularnej - czy u ludzi z czerniakiem występuje wczesne rozprzestrzenianie się komórek czerniaka w histopatologicznie zdrowym wartowniczym węźle chłonnym i skórze okołoguzowej. Obecność tych klonalnych komórek w tych zdrowych tkankach będzie skorelowana z przeżyciem pacjentów po 5 latach i pozwoli na opracowanie nowych obserwacji terapeutycznych i strategii.