Verfolgung der Ausbreitung von Melanomzellen in gesundem Gewebe (DISSEMELA)

In der westlichen Welt ist die Inzidenz des Melanoms in den letzten 50 Jahren stetig gestiegen und wird derzeit als der häufigste Tumor bei 20- bis 29-jährigen Frauen angegeben. BRAF-, NRAS- und c-kit-Gene spielen eine wichtige Rolle bei der Zellproliferation und sind beim Melanom sehr häufig mutiert. Trotz der jüngsten therapeutischen Durchbrüche, die durch den Einsatz neuer Medikamente erzielt wurden, bleibt das metastasierende Melanom immer noch eine lebensbedrohliche Krankheit. Eine der Hauptfragen beim Melanom betrifft die ersten Schritte, die zur Ausbreitung von Metastasen führen, wobei ein besseres Verständnis ein Schlüsselschritt zu seiner Prävention und die Identifizierung neuer molekularer Mechanismen ist, die zur Verbesserung unseres therapeutischen Arsenals eingesetzt werden können.

Die vorgeschlagene Arbeit zielt darauf ab, die Hypothese der frühen Ausbreitung beim menschlichen Melanom unter Verwendung der kürzlich entwickelten leistungsstarken Techniken der E-Eis-Kalt-PCR sowie der klassischen Immunhistochemie zu untersuchen. Dazu nutzen die Forscher die Tatsache, dass die Behandlung von Melanomen auf einer sekundären Exzision der normalen peritumoralen Haut und des Sentinel-Lymphknotens beruht. Dieses peritumorale Gewebe ist groß (mit einem Durchmesser von 2 bis 6 cm), enthält Lymphgefäße in der Hypodermis, dem Gewebe, von dem angenommen wird, dass es den metastatischen Weg von Melanozyten beherbergt, und bleibt teilweise für die Analyse verfügbar.

Alle Patienten mit Melanom im Stadium Ib und II, die in der zwischen 2005 und 2009 eingeschlossenen Pariser Kohorte Melan-Kohorte, Cochin-Krankenhaus und Gustave-Roussy-Institut verfolgt wurden, werden gefunden. Eine PCR-Analyse wird an DNA durchgeführt, die aus in Paraffin eingebetteten Schnitten von Primärtumoren extrahiert wurde. Patienten, die Mutationen in BRAF- (BRAFV600E, BRAFV600K), NRAS- (Codon 61) oder c-kit-Genen aufweisen, werden ausgewählt. Die archivierten, in Paraffin eingebetteten Gewebe aus gesunder periläsionaler Haut sowie aus gesunden Sentinel-Lymphknoten werden gewonnen. Pyrosequenzierung und E-Eis-Kalt-PCR, die auf die Mutationen der oben genannten Gene an ihren üblichen Positionen abzielen, werden an DNA durchgeführt, die aus diesen Proben extrahiert wurde. Immunfluoreszenz-Anti-BRAFV600E- oder Anti-Tumor-/initiierende/Stammzellen werden an denselben Geweben durchgeführt. Diese einfachen Techniken werden unter Verwendung eines empfindlichen molekularbiologischen Werkzeugs testen, ob es bei Menschen mit Melanomen zu einer frühen Ausbreitung von Melanomzellen in histopathologisch gesunden Sentinel-Lymphknoten und peritumoraler Haut kommt. Das Vorhandensein dieser klonalen Zellen in diesen gesunden Geweben wird mit dem Überleben der Patienten nach 5 Jahren korreliert und die Entwicklung neuer therapeutischer Folgemaßnahmen und Strategien ermöglichen.