Fosforylace acetylkoenzymu A karboxylázy krevních destiček u ischemické choroby srdeční (ACCTHEROMA)

Po sobě jdoucí pacienti s plánovaným koronárním angiogramem na Cliniques Universitaires Saint Luc v Bruselu, bez ohledu na indikaci, budou zařazeni mezi březnem 2015 a únorem 2016. Před angiogramem bude získán informovaný souhlas.

A. Odběr krve Rutinní odběr žilní krve bude proveden nalačno na kardiologickém oddělení před angiogramem (standardní péče o pacienty podstupující koronární angiogram).

Aby se zabránilo další punkci pro odběr krve a aby se omezila aktivace krevních destiček, vzorky krve se odebírají po zavedení pouzdra v laboratoři Cath před podáním jakéhokoli léku. Budou provedena následující měření:

• Rutinní koagulační testy zahrnující mezinárodní racionalizační poměr, aktivovaný cefalinový čas, trombinový čas, protrombinový čas, fibrinogen, DDimery.
• Testování reaktivity krevních destiček pomocí agregometru s více elektrodami (Multiplate Analysis)
• Izolace krevních destiček a lyzáty budou skladovány zmrazené pro analýzu fosfoproteinů pomocí imunoblotu a elektrochemiluminiscence (ECLIA)
• Alikvoty chudé plazmy krevních destiček skladované zamražené pro zánět (HsCRP), testy tvorby trombinu (komplex trombinu a antitrombinu, fragment protrombinu F1.2, endogenní potenciál tvorby trombinu-ETP), markery aktivace destiček (faktor krevních destiček 4, rozpustný ligand CD40, rozpustný P- selektin) a extrakce cirkulující mikro-RNA.
• Izolace destiček a další čištění pro extrakci mikro-RNA specifické pro destičky.

B. Hodnocení aterosklerózy Všichni pacienti podstoupili koronární angiogram. Významná léze koronární tepny je definována jako luminální stenóza nad 50 %. Syntaktické skóre bude vypočítáno pro všechny pacienty.

Globální zátěž aterosklerotickým plátem na koronárních a extrakoronárních tepnách bude hodnocena měřením kalciového skóre na torakoabdominálním skeneru s prospektivním EKG gatingem u náhodně vybrané podskupiny pacientů. Kalcifikace koronární arterie (CAC) je vyjádřena jako Agatstonovo skóre pomocí softwaru pro hodnocení vápníku (Philips Healthcare) s prahem 130 Hounsfieldových jednotek. Stupeň aterosklerotické zátěže na koronárních tepnách je klasifikován jako mírný (Agatstonovo skóre <100), střední (Agatstonovo skóre 100-400) nebo těžký (Agatstonovo skóre >400). Kalcifikace aorty (skóre AoC) byla měřena od oblouku aorty po ilické tepny u všech pacientů.

C. Sběr dat Základní charakteristiky pacientů budou shromážděny z lékařské databáze Cliniques Universitaires Saint Luc. Všechny koronární angiogramy budou přezkoumány 2 různými vyšetřovateli a syntaktické skóre bude vypočítáno pomocí online kalkulačky syntaktického skóre. CAC Agatston a skóre AoC budou také hodnoceny 2 různými vyšetřovateli.

D. Klasifikace pacientů pro analýzu P-ACC destiček Analýza fosforylace destiček ACC (P-ACC) bude provedena imunoblotem se specifickou protilátkovou sondou pro fosforylovaný (Ser 79) ACC. Purifikované promyté krevní destičky stimulované 0,5 jednotek/ml trombinu budou použity jako pozitivní vnitřní kontroly.

Pacienti budou nejprve klasifikováni do skupin bez CAD a CAD na základě výsledků koronárního angiogramu a skóre CAC Agatston: Non-CAD (nepřítomnost léze na angiogramu a/nebo skóre CAC Agatston <100) a CAD (přítomnost alespoň 1 léze na angiogramu a/nebo CAC Agatstonovo skóre > 100).

Ve druhé analýze na základě klinické prezentace bude skupina CAD dále rozdělena na stabilní CAD nebo nestabilní CAD [akutní koronární syndrom (ACS)]. Destičkový P-ACC bude srovnán v obou podskupinách. Tato podrobná klasifikace nastíní vysoce rizikové pacienty s probíhajícím akutním koronárním syndromem.

E. Velikost vzorku a statistická analýza. Na základě našich předběžných údajů jsme určili, že zařazení 102 pacientů by poskytlo sílu 80 % na hladině významnosti 5 % k detekci rozdílu 0,15 (A.U.) ve fosforylaci ACC u aterosklerotických pacientů ve srovnání s pacienty bez CAD. .

Spojité proměnné budou vyjádřeny jako průměr +/- jedna směrodatná odchylka, kategorické proměnné jako počty a procenta. Pacienti budou rozděleni do čtyř skupin v závislosti na úrovni P-ACC (kvartily). Klinický obraz, markery tvorby trombinu a kalciové skóre budou porovnány ve všech těchto skupinách na základě analýzy ANOVA. Proměnné budou podrobeny logistickému regresnímu testu za účelem identifikace nezávislých prediktorů stavu vysoké ACC fosforylace. Dále bude studována role vysokých krevních destiček P-ACC při hodnocení rizika pacientů.

F. Sledování Plánuje se období sledování 3 roky. Události zaznamenané během období sledování budou získány z lékařské databáze a v případě chybějících dat bude zavolán.