Fosforilación de acetil coenzima A carboxilasa de plaquetas en la enfermedad de las arterias coronarias (ACCTHEROMA)

Se incluirán pacientes consecutivos con angiografía coronaria planificada en las Cliniques Universitaires Saint Luc, Bruselas, cualquiera que sea la indicación, entre marzo de 2015 y febrero de 2016. Se obtendrá el consentimiento informado antes del angiograma.

A. Muestra de sangre La muestra de sangre venosa de rutina se realizará en ayunas en la sala de cardiología antes del angiograma (estándar de atención para los pacientes que se someten a un angiograma coronario).

Para evitar punciones adicionales para la toma de muestras de sangre y limitar la activación plaquetaria, las muestras de sangre se extraen después de la inserción de la vaina en el laboratorio de cateterismo antes de la administración de cualquier fármaco. Se realizarán las siguientes mediciones:

• Pruebas de coagulación de rutina que incluyen la razón de racionalización internacional, el tiempo de cefalina activada, el tiempo de trombina, el tiempo de protrombina, el fibrinógeno, los dímeros D.
• Prueba de reactividad plaquetaria mediante el Agregador de Electrodos Múltiples (Análisis de Placas Múltiples)
• El aislamiento de plaquetas y los lisados ​​​​se almacenarán congelados para el análisis de fosfoproteínas mediante inmunotransferencia y electroquimioluminiscencia (ECLIA)
• Alícuotas de plasma pobre en plaquetas almacenadas congeladas para la inflamación (HsCRP), pruebas de generación de trombina (complejo de trombina-antitrombina, fragmento de protrombina F1.2, potencial de generación de trombina endógena-ETP), marcadores de activación plaquetaria (factor plaquetario 4, ligando CD40 soluble, P- selectina) y extracción de micro-ARN circulante.
• Aislamiento de plaquetas y purificación adicional para la extracción de micro-ARN específico de plaquetas.

B. Evaluación de la aterosclerosis A todos los pacientes se les realizó una angiografía coronaria. La lesión arterial coronaria significativa se define como una estenosis luminal superior al 50%. La puntuación de sintaxis se calculará para todos los pacientes.

La carga de placa aterosclerótica global en las arterias coronarias y extracoronarias se evaluará midiendo la puntuación de calcio en un escáner toracoabdominal con sincronización ECG prospectiva en un subgrupo de pacientes seleccionados al azar. La calcificación de la arteria coronaria (CAC) se expresa como puntuación de Agatston usando un software de puntuación de calcio (Philips Healthcare) con un umbral de 130 unidades Hounsfield. El grado de carga aterosclerótica sobre las arterias coronarias se clasifica en leve (puntuación de Agatston <100), moderado (puntuación de Agatston 100-400) o grave (puntuación de Agatston >400). La calcificación aórtica (puntuación AoC) se midió desde el arco aórtico hasta las arterias ilíacas en todos los pacientes.

C. Recopilación de datos Las características de referencia de los pacientes se recopilarán de la base de datos médica de Cliniques Universitaires Saint Luc. Todos los angiogramas coronarios serán revisados ​​por 2 investigadores diferentes y la puntuación de sintaxis se calculará con la calculadora de puntuación de sintaxis en línea. La puntuación de CAC Agatston y AoC también será evaluada por 2 investigadores diferentes.

D. Clasificación de pacientes para análisis de P-ACC de plaquetas El análisis de fosforilación de ACC de plaquetas (P-ACC) se realizará mediante inmunotransferencia con un sondeo de anticuerpo específico para ACC fosforilado (Ser 79). Las plaquetas lavadas purificadas estimuladas con 0,5 unidades/ml de trombina se utilizarán como controles internos positivos.

Los pacientes se clasificarán primero en grupos sin CAD y CAD según los resultados del angiograma coronario y la puntuación CAC Agatston: No CAD (ausencia de lesión en el angiograma y/o puntuación CAC Agatston <100) y CAD (presencia de al menos 1 lesión en el angiograma y/o puntaje CAC Agatston >100).

En un segundo análisis, basado en la presentación clínica, el grupo de CAD se dividirá en CAD estable o CAD inestable [síndrome coronario agudo (SCA)]. La P-ACC plaquetaria se comparará en ambos subgrupos. Esta clasificación detallada describirá a los pacientes de alto riesgo con síndrome coronario agudo en curso.

E. Tamaño de la muestra y análisis estadístico. Con base en nuestros datos preliminares, determinamos que la inscripción de 102 pacientes proporcionaría un poder del 80 % a un nivel de significancia del 5 % para detectar una diferencia de 0,15 (AU) en la fosforilación de ACC en pacientes ateroscleróticos, en comparación con pacientes sin CAD .

Las variables continuas se expresarán como media +/- una desviación estándar, las variables categóricas como conteos y porcentajes. Los pacientes se separarán en cuatro grupos según el nivel de P-ACC (cuartiles). La presentación clínica, los marcadores de generación de trombina y la puntuación de calcio se compararán en todos estos grupos, según el análisis ANOVA. Las variables se someterán a una prueba de regresión logística para identificar predictores independientes de un alto estado de fosforilación de ACC. Luego se estudiará el papel de las plaquetas altas P-ACC en la evaluación del riesgo de los pacientes.

F.Seguimiento Se prevé un período de seguimiento de 3 años. Los eventos registrados durante el período de seguimiento se obtendrán de la base de datos médica y se realizará una llamada telefónica en caso de que falten datos.