Фосфорилирование ацетилкоэнзима А карбоксилазы тромбоцитов при ишемической болезни сердца (ACCTHEROMA)

Последовательные пациенты с плановой коронарной ангиографией в Университетской клинике Святого Люка в Брюсселе, независимо от показаний, будут включены в период с марта 2015 г. по февраль 2016 г. Перед ангиографией будет получено информированное согласие.

A. Забор крови. Стандартный образец венозной крови будет взят натощак в кардиологическом отделении перед ангиограммой (стандарт ухода за пациентами, перенесшими коронарографию).

Чтобы избежать дополнительной пункции для забора крови и ограничить активацию тромбоцитов, образцы крови берут после введения интродьюсера в лаборатории рентгенографии перед введением любого лекарства. Будут сделаны следующие измерения:

• Рутинные коагуляционные тесты, включая международное соотношение, активированное кефалиновое время, тромбиновое время, протромбиновое время, фибриноген, DDимеры.
• Тестирование реактивности тромбоцитов с помощью агрегометра с несколькими электродами (анализ на нескольких планшетах)
• Выделение тромбоцитов и лизаты будут храниться в замороженном виде для анализа фосфопротеинов с помощью иммуноблоттинга и электрохемилюминесценции (ECLIA).
• Аликвоты плазмы с низким содержанием тромбоцитов, хранящиеся в замороженном виде (HsCRP), тесты образования тромбина (комплекс тромбина-антитромбина, фрагмент протромбина F1.2, эндогенный потенциал образования тромбина-ETP), маркеры активации тромбоцитов (тромбоцитарный фактор 4, растворимый лиганд CD40, растворимый P- селектин) и выделение циркулирующей микроРНК.
• Выделение тромбоцитов и дальнейшая очистка для выделения специфической микроРНК тромбоцитов.

B. Оценка атеросклероза Всем пациентам была выполнена коронароангиография. Значительное поражение коронарных артерий определяется как стеноз просвета более 50%. Синтаксическая оценка будет рассчитана для всех пациентов.

Общее количество атеросклеротических бляшек на коронарных и экстракоронарных артериях будет оцениваться путем измерения показателя кальция на торако-абдоминальном сканере с проспективным ЭКГ-гейтингом в случайно выбранной подгруппе пациентов. Кальцификация коронарных артерий (CAC) выражается в виде шкалы Agatston с использованием программного обеспечения для оценки кальция (Philips Healthcare) с порогом 130 единиц Хаунсфилда. Степень атеросклеротического бремени коронарных артерий классифицируется как легкая (по шкале Агатстона <100), умеренная (по шкале Агатстона 100-400) и тяжелая (по шкале Агатстона >400). Кальцификация аорты (оценка AoC) измерялась от дуги аорты до подвздошных артерий у всех пациентов.

C. Сбор данных Исходные характеристики пациентов будут взяты из медицинской базы данных Clinique Universitaires Saint Luc. Все коронарные ангиограммы будут рассмотрены двумя разными исследователями, а синтаксическая оценка будет рассчитана с помощью онлайн-калькулятора синтаксической оценки. CAC Agatston и оценка AoC также будут оцениваться двумя разными исследователями.

D. Классификация пациентов для анализа P-ACC тромбоцитов Анализ фосфорилирования ACC тромбоцитов (P-ACC) будет проводиться с помощью иммуноблоттинга с использованием специфического антитела, определяющего фосфорилированный (Ser 79) ACC. Очищенные промытые тромбоциты, стимулированные тромбином в концентрации 0,5 единиц/мл, будут использоваться в качестве положительных внутренних контролей.

Сначала пациенты будут классифицированы в группы без ИБС и ИБС на основании результатов коронарной ангиограммы и шкалы CAC Agatston: без ИБС (отсутствие поражения на ангиограмме и/или оценка CAC Agatston <100) и ИБС (наличие не менее 1 поражение на ангиограмме и/или показатель CAC Agatston>100).

Во втором анализе, основанном на клинической картине, группа ИБС будет дополнительно разделена на стабильную ИБС или нестабильную ИБС [острый коронарный синдром (ОКС)]. Тромбоцитарный P-ACC будет сравниваться в обеих подгруппах. В этой подробной классификации будут описаны пациенты с высоким риском развития острого коронарного синдрома.

E. Размер выборки и статистический анализ. Основываясь на наших предварительных данных, мы определили, что включение 102 пациентов обеспечит мощность 80% при уровне значимости 5% для выявления разницы 0,15 (AU) в фосфорилировании ACC у пациентов с атеросклерозом по сравнению с пациентами без ИБС. .

Непрерывные переменные будут выражены как среднее значение +/- одно стандартное отклонение, категориальные переменные как количество и проценты. Пациенты будут разделены на четыре группы в зависимости от уровня P-ACC (квартили). Клиническая картина, маркеры образования тромбина и оценка кальция будут сравниваться во всех этих группах на основе анализа ANOVA. Переменные будут подвергнуты тесту логистической регрессии, чтобы идентифицировать независимые предикторы состояния высокого фосфорилирования ACC. Затем будет изучена роль P-ACC с высоким уровнем тромбоцитов в оценке риска у пациентов.

F. Последующее наблюдение Планируется период наблюдения в течение 3 лет. События, зарегистрированные в течение периода наблюдения, будут получены из медицинской базы данных, и в случае отсутствия данных будет сделан телефонный звонок.