Acetil coenzima piastrinico A Carbossilasi fosforilazione nella malattia coronarica (ACCTHEROMA)

I pazienti consecutivi con angiografia coronarica pianificata presso le Cliniques Universitaires Saint Luc, Bruxelles, qualunque sia l'indicazione, saranno inclusi tra marzo 2015 e febbraio 2016. Il consenso informato sarà ottenuto prima dell'angiogramma.

A. Prelievo di sangue Il prelievo di sangue venoso di routine verrà eseguito a digiuno nel reparto di cardiologia prima dell'angiogramma (standard di cura per i pazienti sottoposti a coronarografia).

Al fine di evitare ulteriori punture per il prelievo di sangue e limitare l'attivazione piastrinica, i campioni di sangue vengono prelevati dopo l'inserimento della guaina presso il laboratorio di cateterismo prima di qualsiasi somministrazione di farmaci. Verranno effettuate le seguenti misurazioni:

• Test di coagulazione di routine tra cui rapporto di razionalizzazione internazionale, tempo di cefalina attivata, tempo di trombina, tempo di protrombina, fibrinogeno, DDimeri.
• Test di reattività piastrinica mediante Aggregometro a più elettrodi (Analisi a più piastre)
• L'isolamento piastrinico e i lisati saranno stoccati congelati per l'analisi delle fosfoproteine ​​mediante immunoblotting ed elettrochemiluminescenza (ECLIA)
• Aliquote di plasma piastrinico povero immagazzinato congelato per infiammazione (HsCRP), test di generazione di trombina (complesso trombina-antitrombina, frammento di protrombina F1.2, potenziale di generazione di trombina endogena-ETP), marcatori di attivazione piastrinica (fattore piastrinico 4, ligando CD40 solubile, P- selectina) ed estrazione di micro-RNA circolanti.
• Isolamento piastrinico e ulteriore purificazione per l'estrazione di micro-RNA specifico per piastrine.

B. Valutazione dell'aterosclerosi Tutti i pazienti sono stati sottoposti ad angiografia coronarica. Una lesione coronarica significativa è definita come una stenosi luminale superiore al 50%. Il punteggio di sintassi verrà calcolato per tutti i pazienti.

Il carico globale di placca aterosclerotica sulle arterie coronarie ed extracoronariche sarà valutato misurando il punteggio del calcio su scanner toraco-addominale con gating ECG prospettico in un sottogruppo di pazienti selezionato in modo casuale. La calcificazione dell'arteria coronaria (CAC) è espressa come punteggio Agatston utilizzando il software per il punteggio del calcio (Philips Healthcare) con una soglia di 130 unità Hounsfield. Il grado di carico aterosclerotico sulle arterie coronarie è classificato come lieve (punteggio Agatston <100), moderato (punteggio Agatston 100-400) o grave (punteggio Agatston >400). La calcificazione aortica (punteggio AoC) è stata misurata dall'arco aortico alle arterie iliache in tutti i pazienti.

C. Raccolta dei dati Le caratteristiche di base dei pazienti saranno raccolte dal database medico delle Cliniques Universitaires Saint Luc. Tutti gli angiogrammi coronarici saranno esaminati da 2 diversi investigatori e il punteggio di sintassi sarà calcolato con il calcolatore del punteggio di sintassi online. Anche il punteggio CAC Agatston e AoC sarà valutato da 2 diversi ricercatori.

D. Classificazione dei pazienti per l'analisi della P-ACC piastrinica L'analisi della fosforilazione dell'ACC piastrinica (P-ACC) sarà effettuata mediante immunoblotting con un anticorpo specifico per l'ACC fosforilato (Ser 79). Come controlli interni positivi verranno utilizzate piastrine purificate lavate e stimolate con 0.5 unità/ml di trombina.

I pazienti saranno prima classificati in gruppi non-CAD e CAD sulla base dei risultati dell'angiogramma coronarico e del punteggio di Agatston CAC: Non-CAD (assenza di lesione all'angiogramma e/o punteggio di Agatston CAC <100) e CAD (presenza di almeno 1 lesione all'angiogramma e/o CAC Agatston score>100).

In una seconda analisi, basata sulla presentazione clinica, il gruppo CAD sarà ulteriormente suddiviso in CAD stabile o CAD instabile [sindrome coronarica acuta (ACS)]. Il P-ACC piastrinico verrà confrontato in entrambi i sottogruppi. Questa classificazione dettagliata delineerà i pazienti ad alto rischio con sindrome coronarica acuta in corso.

E. Dimensione del campione e analisi statistica. Sulla base dei nostri dati preliminari, abbiamo determinato che l'arruolamento di 102 pazienti fornirebbe una potenza dell'80% a un livello di significatività del 5% per rilevare una differenza di 0,15 (A.U.) nella fosforilazione dell'ACC nei pazienti aterosclerotici, rispetto ai pazienti non CAD .

Le variabili continue saranno espresse come media +/- una deviazione standard, le variabili categoriali come conteggi e percentuali. I pazienti saranno separati in quattro gruppi a seconda del livello di P-ACC (quartili). La presentazione clinica, i marcatori di generazione della trombina e il punteggio del calcio saranno confrontati in tutti questi gruppi, sulla base dell'analisi ANOVA. Le variabili saranno sottoposte a test di regressione logistica al fine di identificare predittori indipendenti di stato di alta fosforilazione dell'ACC. Verrà quindi studiato il ruolo dell'alta P-ACC piastrinica nella valutazione del rischio dei pazienti.

F. Follow-up È previsto un periodo di follow-up di 3 anni. Gli eventi registrati durante il periodo di follow-up saranno ottenuti dal database medico e verrà effettuata una telefonata in caso di dati mancanti.