Galektin-3 u pacientů s endometriózou

Endometrióza je benigní gynekologické onemocnění s maligními biologickými charakteristikami a je definováno přítomností endometriálních žlázek a stromatu mimo dutinu děložní. Ektopické endometriální buňky se mohou rozšířit do pánevních orgánů, jako je konečník, močový měchýř a vaječníky. Patofyziologie endometriózy je pravděpodobně multifaktoriální a zahrnuje souhru několika faktorů. (Fauser BC, Diedrich K, Bouchard P, Domínguez F, Matzuk M, 2011)

Endometriální cyklus a implantace jsou složité procesy. Ke změnám hladin některých regulačních molekul na buněčném povrchu dochází během cyklu přísně kontrolované proliferace a diferenciace. Většina těchto regulačních molekul a mechanismů ještě nebyla prozkoumána, nicméně galektiny, podrodina lektinů, jsou určeny k regulaci životně důležitých funkcí buněk. (Leffler H. et al Úvod do galektinů. Glycoconj j,2004) Bylo ukázáno, že Gal-3 je exprimován v mnoha typech buněk, včetně endometriálních buněk a trofoblastových buněk (Riss D, Naude S 2003). Předchozí studie uvádějí, že Gal-3 je specificky exprimován v endometriálních buňkách v sekreční fázi, v placentární tkáni během časného těhotenství a v decidua obklopující místo implantace. Další studie potvrdila, že Gal-3 hraje důležitou roli v procesu embryonální implantace (Liu YK, Hum Reprod.2009). Intracelulární Gal-3 podporoval proliferaci a adhezi v buňkách endometria (Yang H, TaylorHS, 2011).

Ženský reprodukční systém je zranitelný vůči škodlivým účinkům reaktivních forem kyslíku (ROS), které poškozují proteiny, lipidy a strukturu DNA. Oxidační stres je klíčovým faktorem progrese endometriózy. Dosud bylo vypracováno mnoho teorií k objasnění patogeneze endometriózy a na její patogenezi se podílí oxidační stres, který je výsledkem zvýšené produkce volných radikálů nebo vyčerpání endogenní antioxidační obrany těla.

Naše studie je případová-kontrolní studie, která bude provedena v nemocnici pro ženy a na oddělení lékařské biochemie - Assut University. Odhadneme tkáňovou hladinu galektinu-3 v endometriu zdravých žen i žen s endometriózou a zjistíme, zda galektin-3 vede nebo chrání před endometriózou. Také budeme měřit hladinu markerů oxidačního stresu v endometriu zdravých žen a žen s endometriózou a zkoumat korelaci mezi nimi a galektinem u žen s endometriózou.

Velikost vzorku je vypočítána softwarovým počítačovým programem Epi Info 2000. Na základě očekávaného podílu deficitu galektinu-3 mezi kontrolami bude 20 % a jeho čtyřnásobný nárůst v případech (Poměr lichých = 4) s 80% sílou a hladinou spolehlivosti 95 %, vypočtená velikost vzorku je 45 případů a 45 kontrol. (celkem 90 žen).

Shromážděná data budou zahrnovat věk, paritu, menstruační anamnézu, současnou anamnézu (včetně příznaků bolesti, krvácení a neplodnosti), lékovou anamnézu, anamnézu předchozích onemocnění a všechna provedená vyšetření. Cíl studie bude každému účastníkovi vysvětlen před vyplněním studijního listu. Od těch, kteří uvítají účast ve studii, bude získán písemný souhlas, poté budou ženy rozděleny do 2 skupin.

Skupina 1:

45ženy, u kterých byla nalezena chirurgicky a histolopatologicky potvrzená endometrióza. Endometriální vzorky (1-2 gramy) budou odebrány laparoskopií, která je zlatým standardem pro definitivní diagnostiku endometriózy.

Skupina 2:

45 žen bez endometriózy. Tyto ženy měly normální menstruační cykly a během 3 měsíců před odběrem nedostaly hormonální léčbu. Vzorky endometria (1-2 gramy) jim budou odebrány prostřednictvím Punch biopsie po zavedení IUD.

Galektin-3 bude stanoven pomocí soupravy ELISA. Endometriální vzorky (1-2 gramy) budou odděleny od každé ženy během proliferační fáze (dny 5-15) a několikrát promyty 0,9% sterilním fyziologickým roztokem, aby se odstranila jakákoli krev z tkání. Vzorky tkáně budou homogenizovány tkáňovým homogenizátorem při 40 000 ot./min. Extrakty supernatantu budou shromážděny v Ependorfových zkumavkách a zmraženy při -80 °C do analýzy pomocí ELISA.

Hladiny NO a TBARS (markery oxidačního stresu) v tkáních byly stanoveny chemickými metodami podle metod popsaných Van Bezooijen et al, (1998), respektive Buege a Aust (1978). Také hladiny aktivity katalázy (CAT), glutathionu (GSH) a superoxiddismutázy (SOD) (antioxidanty) byly stanoveny chemickými metodami podle metod popsaných Clairbornem (1985), Beutlerem a kol. (1963) a Marklund (1985).