Galektyna-3 u pacjentów z endometriozą

Endometrioza jest łagodnym schorzeniem ginekologicznym o złośliwych cechach biologicznych i charakteryzuje się obecnością gruczołów endometrialnych i podścieliska poza jamą macicy. Ektopowe komórki endometrium mogą rozprzestrzeniać się na narządy miednicy, takie jak odbytnica, pęcherz moczowy i jajniki. Patofizjologia endometriozy jest prawdopodobnie wieloczynnikowa i obejmuje wzajemne oddziaływanie kilku czynników. (Fauser BC, Diedrich K, Bouchard P, Domínguez F, Matzuk M, 2011)

Cykl endometrialny i implantacja to złożone procesy. Zmiany poziomów niektórych cząsteczek regulatorowych na powierzchni komórki zachodzą podczas cyklu ściśle kontrolowanej proliferacji i różnicowania. Większość z tych cząsteczek i mechanizmów regulacyjnych nie została jeszcze zbadana, jednak galektyny, podrodzina lektyn, są wyznaczone do regulowania funkcji życiowych komórek. (Leffler H. i in. Wprowadzenie do galektyn. Glycoconj j,2004) Wykazano, że Gal-3 ulega ekspresji w wielu typach komórek, w tym w komórkach endometrium i komórkach trofoblastu (Riss D, Naude S 2003). Wcześniejsze badania wykazały, że Gal-3 jest specyficznie eksprymowany w komórkach endometrium w fazie wydzielniczej, w tkance łożyska podczas wczesnej ciąży oraz w doczesnej otaczającej miejsce implantacji. Inne badanie potwierdziło, że Gal-3 odgrywa ważną rolę w procesie implantacji zarodka (Liu YK, Hum Reprod.2009). Wewnątrzkomórkowy Gal-3 promuje proliferację i adhezję w komórkach endometrium (Yang H, TaylorHS, 2011).

Żeński układ rozrodczy jest podatny na szkodliwe działanie reaktywnych form tlenu (ROS), które uszkadzają białka, lipidy i strukturę DNA. Stres oksydacyjny jest kluczowym czynnikiem progresji endometriozy. Dotychczas opracowano wiele teorii wyjaśniających patogenezę endometriozy, a stres oksydacyjny, będący wynikiem zwiększonej produkcji wolnych rodników lub wyczerpania endogennej obrony antyoksydacyjnej organizmu, jest zaangażowany w jej patogenezę.

Nasze badanie jest badaniem kliniczno-kontrolnym, które zostanie przeprowadzone w szpitalu zdrowia kobiet i wydziale biochemii medycznej - uniwersytetu Assut. Oszacujemy tkankowy poziom galektyny-3 w endometrium zarówno kobiet zdrowych, jak i kobiet z endometriozą oraz wykryjemy, czy galektyna-3 prowadzi do endometriozy lub chroni przed endometriozą. Zmierzymy również poziom markerów stresu oksydacyjnego w endometrium zarówno kobiet zdrowych, jak i kobiet z endometriozą oraz zbadamy korelację między nimi a kobietami z endometriozą z galektyną.

Wielkość próbki jest obliczana przez program komputerowy Epi Info 2000. W oparciu o oczekiwany odsetek niedoboru Galektyny-3 wśród kontroli wyniesie 20% i czterokrotny wzrost przypadków (współczynnik nieparzystości = 4) przy mocy 80% i poziomie ufności 95%, obliczona wielkość próby wynosi 45 przypadków i 45 kontroli (łącznie 90 kobiet).

Zebrane dane będą obejmować wiek, poród, historię miesiączkowania, obecną historię (w tym objawy bólu, krwawienia i bezpłodności), historię leków, historię poprzednich chorób i wszelkie wykonane badania. Cel badania zostanie wyjaśniony każdemu uczestnikowi przed wypełnieniem arkusza badania. Od chętnych do udziału w badaniu uzyskana zostanie pisemna zgoda, następnie kobiety zostaną podzielone na 2 grupy.

Grupa 1:

45 kobiet, u których stwierdzono chirurgicznie i histopatologicznie potwierdzoną endometriozę. Próbki endometrium (1-2 gramy) zostaną pobrane podczas laparoskopii, która jest złotym standardem ostatecznej diagnozy endometriozy.

Grupa 2:

45 kobiet wolnych od endometriozy. Kobiety te miały normalne cykle miesiączkowe i nie otrzymywały terapii hormonalnej w ciągu 3 miesięcy przed pobraniem próbki. Z nich zostaną pobrane próbki endometrium (1-2 gramy) poprzez biopsję Puncha po założeniu wkładki.

Galektyna-3 zostanie oszacowana za pomocą zestawu ELISA. Próbki endometrium (1-2 gramy) zostaną oddzielone od każdej kobiety podczas fazy proliferacyjnej (dni 5-15) i przemyte kilka razy 0,9% sterylnym roztworem soli fizjologicznej w celu usunięcia krwi z tkanek. Próbki tkanek będą homogenizowane przez homogenizator tkanek przy 40 000 obr./min. Ekstrakty znad osadu będą zbierane w probówkach Ependorfa i zamrażane w temperaturze -80°C do czasu analizy metodą ELISA.

Poziomy NO i TBARS w tkankach (markery stresu oksydacyjnego) określono metodami chemicznymi zgodnie z metodami opisanymi odpowiednio przez Van Bezooijena i in., (1998) oraz Buege i Aust (1978). Również tkankowe poziomy aktywności katalazy (CAT), glutationu (GSH) i dysmutazy ponadtlenkowej (SOD) (przeciwutleniaczy) określono metodami chemicznymi zgodnie z metodami opisanymi przez Clairborne (1985), Beutler i in. (1963) i Marklunda (1985).