Vysvětlení pro negativní laparoskopické apendektomie a normální laparoskopie

Cíl Cílem studie je zjistit, která infekční onemocnění mohou napodobovat příznaky akutní apendicitidy do té míry, že způsobí diagnostickou laparoskopii nebo laparoskopickou apendektomii.

Primární výsledek Srovnání výskytu Yersinia spp. (enterokolitida a/nebo pseudotuberkulóza) infekce diagnostikovaná pomocí PCR na stěrech z konečníku ve dvou skupinách: pacienti s histopatologicky potvrzeným zánětem (skupina s apendicitidou) a pacienti s jedním z následujících: histopatologicky normální apendix bez zánětu, mezenterická lymfadenitida nebo normální diagnostika laparoskopie (normální skupina slepého střeva).

Sekundární výsledky Porovnání výskytu dalších mikrobů: Campylobacter spp., Salmonella spp., Shigella spp. a Aeromonas spp. zjištěno pomocí PCR z rektálních výtěrů ve dvou skupinách: skupina s normálním apendixem versus apendicitidou.

Pacienti pozitivní na Yersinia spp. budou hodnoceny individuálně v podskupinách dvou skupin: skupina s apendicitidou a skupina s normálním apendixem. Sérologické vyšetření Yersinie bude provedeno, pokud bude dosaženo financování.

Srovnání výskytu Enterobius vermicularis zjištěného při histopatologickém vyšetření ve dvou skupinách.

Design Prospektivní, observační kohortová studie. Účastníci zkoušky Kritéria zařazení

• ≥18 let
• Podezření na akutní apendicitidu a plánovaná diagnostická laparoskopie
• Písemný informovaný souhlas po písemné a ústní informaci Kritéria vyloučení
• Nerozumí, číst nebo mluvit dánsky
• Známý se zánětlivým onemocněním střev
• Jiná nitrobřišní patologie než apendicitida vyžadující jinou chirurgickou intervenci nebo léčbu (diagnostikována buď peroperačně, na předoperačním CT vyšetření nebo krátce po operaci při histopatologickém vyšetření)
• nepodstupují diagnostickou laparoskopii, laparoskopickou apendektomii nebo otevřenou apendektomii
• Použití antimikrobiálních látek během dvou týdnů před zařazením do skutečného přijetí pro akutní bolest břicha

Zkušební průběh Pacienti jsou přijímáni na chirurgické oddělení nemocnice Herlev s podezřením na akutní apendicitidu. Chirurg z oddělení buď naplánuje akutní operaci, nebo si pacienty ponechá na další pozorování. Vyšetřovatelé studie nebo výzkumní asistenti osloví tyto pacienty, aby jim poskytli informace o studii. Vyšetřovatelé tak zajistí, že pacient má v tomto akutním stavu co nejvíce času na zvážení. Pacienti, kteří splňují kritéria pro zařazení a žádné z kritérií pro vyloučení (kromě kritérií, která lze objasnit až při operaci nebo po operaci), jsou do studie zařazeni po informovaném souhlasu. Základní charakteristiky zařazených pacientů včetně jejich anamnézy, cestovní anamnézy a gastrointestinálních příznaků budou registrovány v elektronických formulářích případových zpráv (eCRF) v RedCAP. Před operací se odebírají vzorky krve a rektální výtěr. Do lékařského záznamu pacienta bude přidána poznámka o zařazení pacienta do studie. Zařazení pacienti podstoupí diagnostickou laparoskopii provedenou podle standardní klinické praxe. Pokud je slepé střevo odstraněno během operace, bude pooperačně odebrán stěr z odstraněného apendixu. Výtěr z apendixu bude odebrán pouze v případě, že vzhled odstraněného apendixu není podezřelý pro maligní onemocnění (SOP_Appendixpodning). Je to v dohodě s patologickým oddělením nemocnice Herlev, aby nebylo kompromitováno histopatologické vyšetření a zabránilo se šíření maligních buněk ve vzácném případě nádoru slepého střeva. Pokud existují nějaké pochybnosti o vzhledu apendixu, žádný výtěr nebude odebrán. Deset dní po operaci bude provedena kontrola zdravotní dokumentace pacienta s ohledem na zprávu o patologii. Tyto výsledky jsou zaznamenány v pacientově eCRF.

Kritéria odvolání a předčasného ukončení Účastníci mohou svůj souhlas odvolat kdykoli během zkoušky. Odebrané vzorky krve, rektální výtěr a případný výtěr z apendixu budou zničeny, pokud účastník odvolá souhlas. Účastník dokončil zkoušku deset dní po operaci, kdy je k dispozici jak konečný záznam operace, tak patologická zpráva. Pacienti, kteří během operace nebo krátce po operaci splní jakékoli vylučovací kritérium týkající se jiné nitrobřišní patologie, stavů vyžadujících jinou léčbu nebo nepodstoupí plánovanou operaci, ze studie vypadnou a budou tak ze studie vyloučeni a odebraná krev vzorek, rektální výtěr a případný výtěr ze slepého střeva budou zničeny. Účastník dokončil studii, když bylo provedeno 10denní pooperační sledování.

Primární výsledek

Primární výsledek bude založen na kumulativních výsledcích obou metod:

• Detekce infekce Yersinia spp. (enterokolitida a/nebo pseudotuberkulóza) mikrobiologickým vyšetřením rektálního výtěru: Vzorky (rektální výtěr) odebrané před operací jsou okamžitě zmraženy na -80 °C a uloženy v nemocnici Herlev ve výzkumné biobance. Když poslední pacient dokončí studii, část odebraných vzorků od každého pacienta je odeslána na oddělení klinické mikrobiologie nemocnice Hvidovre a poté vyšetřena pomocí PCR v reálném čase na Yersinia spp. Tyto výsledky jsou zaznamenány v pacientově eCRF, ale nikoli v pacientově lékařském záznamu. Vzorky s pozitivním výsledkem PCR budou kultivovány na Yersinia spp. a v případě pozitivních výsledků kultivace bude provedeno testování citlivosti (sekundární výsledek). Poté bude shromážděný lidský materiál a kultivovaná Yersinia enterocolitica zmrazený na -80 °C a uložen po dobu deseti let v nemocnici Hvidovre jako biobanka pro budoucí výzkum.

Sekundární výsledky

• Sérologie Yersinia enterocolitica: Tento výsledek bude uveden v plánované publikaci, pokud bude dosaženo dostatečného financování, jinak bude prezentován v pozdější publikaci. Šest ml krve odebrané před operací je okamžitě zmrazeno na -80 °C a uloženo v nemocnici Herlev ve výzkumné biobance. Když poslední pacient dokončí studii, vzorek krve pro sérologii od každého pacienta je odeslán do Statens Serum Institut. Zde jsou vzorky krve vyšetřeny co nejdříve po příjezdu pomocí interního testu ELISA na Yersinia enterocolitica IgM, IgA a IgG. Po analýze budou vzorky séra zmraženy na -80 °C a uloženy po dobu deseti let ve Statens Serum Institut jako biobanka pro budoucí výzkum. Poté budou vzorky anonymizovány a převedeny do biobanky pro budoucí výzkum, která patří Statens Serum Institut.

• Detekce dalších bakteriálních patogenů: Vzorky (rektální výtěr) odebrané před operací se okamžitě zmrazí na -80 °C a skladují v nemocnici Herlev ve výzkumné biobance. Když poslední pacient dokončí studii, část odebraných vzorků od každého pacienta je odeslána na Oddělení klinické mikrobiologie nemocnice Hvidovre a poté vyšetřena pomocí multiplexní PCR v reálném čase na:

  • Campylobacter spp.
  • Salmonella spp.
  • Shigella spp.
  • Aeromonas spp. Vzorky s pozitivními výsledky PCR na bakteriální patogeny budou kultivovány (včetně Yersinia spp.) a v případě pozitivní kultivace bude provedeno testování citlivosti. Odebraný lidský materiál a kultivované bakterie budou poté zmrazeny na -80 °C a uloženy po dobu deseti let na tomto místě jako výzkumná biobanka, dále budou vzorky anonymizovány.
• Kombinovaný výsledek sérologie a PCR pro Yersinia spp.: Viz popis výše. Tento výsledek bude hlášen pouze v případě, že bude dosaženo financování.
• Plazma a plná krev se uchovávají pro pozdější analýzu. Každému pacientovi bude odebráno 12 ml krve: 6 ml bude použito k vytvoření vzorků plazmy EDTA a buffycoat a 6 ml bude uloženo jako vzorky séra. Pro odebrané vzorky bude zřízena výzkumná biobanka, která bude zamražena a uchovávána při -80°C po dobu deseti let. Poté jsou vzorky plazmy a plné krve zničeny. Před zahájením dalších šetření bude ohledně použití této výzkumné biobanky kontaktován místní etický výbor pro výzkum zdraví (hlavní město Dánska). Účastníci budou požádáni o souhlas konkrétně s biologickým materiálem pro biobanku pro budoucí výzkum.
• Zbývající frakce vzorků z rektálních výtěrů a vzorky z výtěrů z apendixu jsou uloženy pro pozdější analýzu. Pro odebrané vzorky v nemocnici Herlev bude zřízena výzkumná biobanka, které budou zmrazeny a skladovány při -80 °C po dobu deseti let. Poté jsou vzorky zničeny. Před zahájením dalších šetření bude kontaktován místní Etický výbor pro výzkum zdraví (hlavní město Dánska) ohledně použití výzkumné biobanky. Účastníci budou požádáni o souhlas konkrétně s biologickým materiálem pro biobanku pro budoucí výzkum.

Statistika Průběžná numerická data budou uváděna jako průměr a standardní odchylka, pokud jsou normálně rozděleny. Pokud nejsou normálně rozložena, budou kontinuální numerická data uváděna jako medián a percentily. Vyšetřovatelé budou analyzovat data pomocí parametrických i neparametrických statistik v závislosti na distribuci dat. Hodnota p < 0,05 se považuje za významnou.

Výpočet výkonu je následující. Míra Yersinia spp. ve skupině apendicitidy se očekává 13 %. Očekává se, že velikosti skupin nebudou stejné. Přibližně 80 % zahrnutých pacientů bude ve skupině s apendicitidou a 20 % bude ve skupině s normálním apendixem.

Když je alfa nastavena na 0,05, beta je nastavena na 0,80 a nejméně zajímavý rozdíl mezi skupinami je nastaven na 20 %, je zapotřebí celkem 225 pacientů: 45 pacientů ve skupině s normálním apendixem a 180 pacientů ve skupině se zánětem slepého střeva.