Prospektivní multicentrické hodnocení soupravy MycoGenie pro diagnostiku invazivní aspergilózy (MYCOGENIE)

Přesná diagnóza invazivní plicní aspergilózy (IPA) u pacientů s vysokým rizikem invazivní mykotické infekce zůstává náročná kvůli obtížím při odlišení IPA od plicních infekcí způsobených jinými plísněmi nebo bakteriemi na klinických a radiologických základech. Mikrobiologická diagnostika založená na kultivaci má proto prvořadý význam, vyžaduje však semiinvazivní nebo invazivní postupy, jako je bronchoalveolární laváž (BAL) nebo biopsie jehlou řízenou počítačovou tomografií (CT).

Alternativní diagnostické metody zahrnují detekci biomarkerů, jako jsou houbové antigeny (Aspergillus galaktomannan [GM]) nebo DNA uvolňované Aspergillus hyphae v hostitelských tkáních. Tyto biomarkery jsou dobře uznávány jako časné prediktory IPA V nedávné době několik klinických hodnocení k detekci DNA Aspergillus, buď ve vzorcích dýchacích cest nebo ve vzorcích krve, jasně ukázalo diagnostickou hodnotu tohoto biomarkeru. Kromě toho byla stanovena metodologická doporučení pro protokoly PCR a byly komercializovány různé standardizované soupravy pro kvantitativní PCR (qPCR) Aspergillus. Tyto nedávné pokroky ukazují, že PCR je nyní zralá pro rutinní použití v klinických podmínkách.

Dalším problémem je vznik aspergilózy v důsledku izolátů odolných vůči azolům. Získaná azolová rezistence u A. fumigatus byla hlášena od roku 1997 a objevila se v mnoha zemích, zejména v Evropě, stejně jako na jiných kontinentech. V některých případech může být získaná rezistence řízena antifungální selekcí u pacientů, kteří dostávají dlouhodobou terapii. Přesto se zdá, že mnoho kmenů rezistentních vůči azolům vzniklo v životním prostředí díky selekci azolovými fungicidy používanými v zemědělství. Azolová rezistence u A. fumigatus je spojena především s mutacemi v genu cyp51A a z několika popsaných mutací je nejčastější mutace obsahující 34-bp tandemovou repetici (TR34) a alteraci L98H. Vzhledem k tomu, že azoly jsou doporučenou léčbou první volby pro IPA, je vznik azolové rezistence znepokojivý a ukázalo se, že je spojen se zvýšenou mírou klinického selhání. Z těchto důvodů bylo v poslední době doporučeno rutinní testování antimykotické citlivosti klinických izolátů. Nicméně izoláty nejsou vždy získány v kultuře, zejména u pacientů s hematologickými malignitami. Molekulární detekce rezistence proto může být velkým pokrokem v léčbě pacientů s invazivní aspergilózou.

Cílem této studie bude validovat novou Real-time PCR soupravu MycoGENIE A. fumigatus a vyhodnotit její účinnost na klinických vzorcích pro detekci A. fumigatus a její azolové rezistence. Tento multiplexní test detekuje DNA z komplexu druhů A. fumigatus zacílením na multikopiový gen 28S rRNA a specifické mutace TR34 a L98H v genu cyp51A s jedinou kopií A. fumigatus.

Studie bude provedena u hematologických pacientů s vysokým rizikem rozvoje IA v průběhu chemoterapie. U těchto pacientů je ve všech centrech ve Francii rutinně prováděna dvoutýdenní detekce GM. PCR bude provedena na vzorcích použitých pro detekci GM. DNA bude extrahována podle protokolu výrobce pomocí sady MycoGENIE pro roztok AutoMag. Real-time PCR pro detekci DNA A. fumigatus bude provedena pomocí Real-time PCR kitu MycoGENIE A. fumigatus (Ademtech, Pessac, Francie).

AI bude definována jako prokázaná nebo pravděpodobná aspergilóza podle kritérií EORTC.

Pro každého pacienta budou v každém centru shromažďována klinická data. Mezi tyto údaje patří: EORTC klasifikace, typ a délka antimykotické léčby, výsledky GM testů, výsledky mykologických kultur a výsledky PCR testů (pozitivita a hodnoty Ct). Pro každého pacienta bude vyplněn formulář kazuistiky (CRF), který bude předán do vyšetřovacího centra k analýze. Bude vypočtena citlivost, specificita, PPV a NPV testu PCR.