Prospectieve multicenterevaluatie van de MycoGenie-kit voor de diagnose van invasieve aspergillose (MYCOGENIE)

Nauwkeurige diagnose van invasieve pulmonale aspergillose (IPA) bij patiënten met een hoog risico op invasieve schimmelinfectie blijft een uitdaging vanwege moeilijkheden bij het onderscheiden van IPA van longinfecties veroorzaakt door andere schimmels of bacteriën op klinische en radiologische gronden. Daarom is op cultuur gebaseerde microbiologische diagnose van primair belang, maar vereist semi-invasieve of invasieve procedures, zoals bronchoalveolaire lavage (BAL) of computertomografie (CT)-geleide naaldbiopsie.

Alternatieve diagnostische methoden omvatten de detectie van biomarkers, zoals schimmelantigenen (Aspergillus galactomannan [GM]) of DNA dat vrijkomt door Aspergillus hyphae in gastheerweefsels. Deze biomarkers worden algemeen erkend als vroege IPA-voorspellers Onlangs hebben verschillende klinische evaluaties om Aspergillus-DNA te detecteren, hetzij in respiratoire of in bloedmonsters, de diagnostische waarde van deze biomarker duidelijk aangetoond. Daarnaast zijn er methodologische aanbevelingen opgesteld voor PCR-protocollen en zijn er verschillende gestandaardiseerde Aspergillus kwantitatieve PCR (qPCR)-kits op de markt gebracht. Deze recente vorderingen tonen aan dat PCR nu volwassen is voor routinematig gebruik in klinische omgevingen.

Een ander probleem is de opkomst van aspergillose als gevolg van azoolresistente isolaten. Verworven azoolresistentie bij A. fumigatus wordt sinds 1997 gemeld en is in veel landen, met name in Europa, en ook op andere continenten ontstaan. In sommige gevallen kan verworven resistentie het gevolg zijn van antifungale selectie bij patiënten die langdurig worden behandeld. Niettemin lijkt het erop dat veel azoolresistente stammen in het milieu zijn ontstaan ​​als gevolg van selectie door azoolfungiciden die in de landbouw worden gebruikt. Azoolresistentie bij A. fumigatus wordt voornamelijk in verband gebracht met mutaties in het cyp51A-gen, en van de verschillende beschreven mutaties is de meest voorkomende de mutatie bestaande uit een 34-bp tandem repeat (TR34) en de L98H-verandering. Aangezien azolen de aanbevolen eerstelijnsbehandeling voor IPA zijn, is de opkomst van azolresistentie zorgelijk en er is aangetoond dat het verband houdt met een verhoogd aantal gevallen van klinisch falen. Om deze redenen is recentelijk routinematig antifungale gevoeligheidstesten van klinische isolaten aanbevolen. Toch worden isolaten niet altijd in kweek teruggevonden, vooral niet bij patiënten met hematologische maligniteiten. Daarom kan moleculaire detectie van resistentie een belangrijke vooruitgang zijn voor de behandeling van patiënten met invasieve aspergillose.

Het doel van deze studie is het valideren van de nieuwe MycoGENIE A. fumigatus real-time PCR-kit en het evalueren van de prestaties ervan op klinische monsters voor de detectie van A. fumigatus en zijn azoolresistentie. Deze multiplexassay detecteert DNA van het A. fumigatus-soortencomplex door zich te richten op het multicopy 28S rRNA-gen en specifieke TR34- en L98H-mutaties in het single-copy number cyp51A-gen van A. fumigatus.

De studie zal worden uitgevoerd bij hematologische patiënten met een hoog risico op het ontwikkelen van IA tijdens chemotherapie. Bij deze patiënten wordt routinematig tweewekelijkse detectie van GM uitgevoerd in alle centra in Frankrijk. De PCR zal worden uitgevoerd op de monsters die worden gebruikt voor GM-detectie. DNA wordt geëxtraheerd volgens het protocol van de fabrikant, met behulp van de MycoGENIE-kit voor AutoMag-oplossing. Realtime PCR voor de detectie van A. fumigatus-DNA zal worden uitgevoerd met behulp van de MycoGENIE A. fumigatus real-time PCR-kit (Ademtech, Pessac, Frankrijk).

AI zal worden gedefinieerd als bewezen of waarschijnlijke aspergillose, volgens de EORTC-criteria.

Per patiënt zullen in elk centrum klinische gegevens worden verzameld. Deze gegevens omvatten: EORTC-classificatie, type en duur van antischimmelbehandelingen, resultaten van GM-testen, resultaten van mycologische kweken en resultaten van PCR-testen (positiviteit en Ct-waarden). Voor elke patiënt wordt een casusrapportageformulier (CRF) ingevuld en voor analyse naar het onderzoekscentrum overgebracht. Gevoeligheid, specificiteit, PPV en NPV van de PCR-test worden berekend.