Az invazív aspergillózis diagnosztizálására szolgáló MycoGenie készlet jövőbeli többközpontú értékelése (MYCOGENIE)

Az invazív pulmonalis aspergillosis (IPA) pontos diagnosztizálása az invazív gombás fertőzés magas kockázatának kitett betegeknél továbbra is kihívást jelent, mivel klinikai és radiológiai okokból nehéz megkülönböztetni az IPA-t az egyéb penészgombák vagy baktériumok által okozott tüdőfertőzésektől. Ezért a tenyészeten alapuló mikrobiológiai diagnózis elsődleges fontosságú, de félinvazív vagy invazív eljárásokra van szükség, mint például a bronchoalveolaris Lavage (BAL) vagy a számítógépes tomográfia (CT) által vezérelt tűbiopszia.

Alternatív diagnosztikai módszerek közé tartozik a biomarkerek, például a gomba antigének (Aspergillus galactomannán [GM]) vagy az Aspergillus hyphae által a gazdaszövetekben felszabaduló DNS kimutatása. Ezek a biomarkerek jól ismertek, mint korai IPA prediktorok. A közelmúltban számos klinikai értékelés az Aspergillus DNS kimutatására, akár légúti, akár véralapú mintákból egyértelműen kimutatta ennek a biomarkernek a diagnosztikai értékét. Emellett módszertani ajánlásokat dolgoztak ki a PCR protokollokhoz, és különböző szabványosított Aspergillus kvantitatív PCR (qPCR) kiteket hoztak forgalomba. Ezek a közelmúltbeli fejlesztések azt mutatják, hogy a PCR már kiforrott a klinikai körülmények között történő rutinszerű használatra.

Egy másik probléma az aspergillózis megjelenése az azol-rezisztens izolátumok miatt. Az A. fumigatus szerzett azolrezisztenciáját 1997 óta jelentették, és számos országban, különösen Európában, valamint más kontinenseken is megjelent. Egyes esetekben a szerzett rezisztenciát a gombaellenes szer szelekciója okozhatja a hosszú távú kezelésben részesülő betegeknél. Mindazonáltal úgy tűnik, hogy sok azol-rezisztens törzs a mezőgazdaságban használt azol-fungicidek szelekciója következtében került ki a környezetből. Az A. fumigatus azol rezisztenciája főként a cyp51A gén mutációihoz kapcsolódik, és számos leírt mutáció közül a leggyakoribb a 34 bp tandem ismétlődést (TR34) és az L98H elváltozást tartalmazó mutáció. Mivel az azolok az IPA javasolt első vonalbeli kezelése, az azolrezisztencia kialakulása aggasztó, és kimutatták, hogy a klinikai kudarcok megnövekedett arányával jár. Ezen okok miatt a közelmúltban javasolták a klinikai izolátumok gombaellenes érzékenységének rutinszerű vizsgálatát. Mindazonáltal az izolátumokat nem mindig nyerik ki a tenyészetben, különösen a rosszindulatú hematológiai daganatos betegek esetében. Ezért a rezisztencia molekuláris kimutatása jelentős előrelépést jelenthet az invazív aspergillózisban szenvedő betegek kezelésében.

E tanulmány célja az új MycoGENIE A. fumigatus valós idejű PCR készlet validálása, valamint klinikai mintákon való teljesítményének értékelése az A. fumigatus és az azolrezisztencia kimutatására. Ez a multiplex vizsgálat kimutatja az A. fumigatus fajkomplexből származó DNS-t az A. fumigatus többkópiás 28S rRNS génjének és specifikus TR34 és L98H mutációinak megcélzásával az A. fumigatus egykópiás cyp51A génjében.

A vizsgálatot olyan hematológiai betegeken végzik el, akiknél a kemoterápia során nagy a kockázata az IA kialakulásának. Ezeknél a betegeknél a GM kimutatását kéthetente rutinszerűen végzik minden franciaországi központban. A PCR-t a GM kimutatására használt mintákon végzik el. A DNS-t a gyártó protokollja szerint vonják ki az AutoMag oldathoz készült MycoGENIE készlet használatával. Az A. fumigatus DNS kimutatására szolgáló valós idejű PCR-t a MycoGENIE A. fumigatus valós idejű PCR kit (Ademtech, Pessac, Franciaország) segítségével hajtják végre.

Az EORTC kritériumai szerint a mesterséges intelligencia bizonyított vagy valószínű aspergillózisnak minősül.

Minden betegről klinikai adatokat gyűjtenek az egyes központokban. Ezek az adatok a következők: EORTC besorolás, gombaellenes kezelések típusa és időtartama, GM-vizsgálatok eredményei, mikológiai tenyészetek eredményei és PCR-vizsgálatok eredményei (pozitivitás és Ct értékek). Minden beteg esetében ki kell tölteni egy esetjelentési űrlapot (CRF), amelyet elemzés céljából továbbítanak a vizsgálóközpontba. Ki kell számítani a PCR-teszt érzékenységét, specificitását, PPV-jét és NPV-jét.