Prospektiv multisenterevaluering av MycoGenie-settet for diagnostisering av invasiv aspergillose (MYCOGENIE)

Nøyaktig diagnose av invasiv lungeaspergillose (IPA) hos pasienter med høy risiko for invasiv soppinfeksjon er fortsatt utfordrende på grunn av vanskeligheter med å skille IPA fra lungeinfeksjoner forårsaket av andre muggsopp eller bakterier på kliniske og radiologiske grunner. Derfor er kulturbasert mikrobiologisk diagnose av primær betydning, men krever semi-invasive eller invasive prosedyrer, som bronkoalveolar lavage (BAL) eller computertomografi (CT)-veiledet nålebiopsi.

Alternative diagnostiske metoder inkluderer påvisning av biomarkører, slik som soppantigener (Aspergillus galactomannan [GM]) eller DNA frigitt av Aspergillus-hyfer i vertsvev. Disse biomarkørene er godt anerkjent som tidlige IPA-prediktorer Nylig har flere kliniske evalueringer for å oppdage Aspergillus DNA, enten i luftveier eller i blodbaserte prøver, tydelig vist den diagnostiske verdien av denne biomarkøren. I tillegg er det etablert metodiske anbefalinger for PCR-protokoller, og forskjellige standardiserte Aspergillus kvantitative PCR (qPCR)-sett har blitt kommersialisert. Disse nylige fremskrittene viser at PCR nå er moden for rutinemessig bruk i kliniske omgivelser.

Et annet problem er fremveksten av aspergillose på grunn av azol-resistente isolater. Ervervet azolresistens hos A. fumigatus har blitt rapportert siden 1997 og har dukket opp i mange land, spesielt i Europa, så vel som på andre kontinenter. I noen tilfeller kan ervervet resistens være drevet av antifungal seleksjon hos pasienter som får langtidsbehandling. Likevel ser det ut til at mange azolresistente stammer har sin opprinnelse i miljøet på grunn av seleksjon av azolsoppmidler brukt i landbruket. Azolresistens hos A. fumigatus er hovedsakelig assosiert med mutasjoner i cyp51A-genet, og blant flere mutasjoner beskrevet er den hyppigste mutasjonen som omfatter en 34-bp tandem-repetisjon (TR34) og L98H-endringen. Siden azoler er den anbefalte førstelinjebehandlingen for IPA, er fremveksten av azolresistens bekymringsfull og har vist seg å være assosiert med økt forekomst av klinisk svikt. Av disse grunner har rutinemessig antifungal følsomhetstesting av kliniske isolater blitt anbefalt nylig. Likevel blir isolater ikke alltid hentet i kultur, spesielt for pasienter med hematologiske maligniteter. Derfor kan molekylær deteksjon av resistens være et stort fremskritt for behandling av pasienter med invasiv aspergillose.

Målet med denne studien vil være å validere det nye MycoGENIE A. fumigatus sanntids PCR-settet og å evaluere dets ytelse på kliniske prøver for påvisning av A. fumigatus og dets azolresistens. Denne multipleksanalysen detekterer DNA fra A. fumigatus-artkomplekset ved å målrette mot multikopi 28S rRNA-genet og spesifikke TR34- og L98H-mutasjoner i enkeltkopinummer cyp51A-genet til A. fumigatus.

Studien vil bli utført på hematologiske pasienter med høy risiko for å utvikle IA i løpet av kjemoterapi. Hos disse pasientene utføres rutinemessig påvisning av GM hver annen uke i alle sentre i Frankrike. PCR vil bli utført på prøvene som brukes til GM-deteksjon. DNA vil bli ekstrahert i henhold til produsentens protokoll ved bruk av MycoGENIE-settet for AutoMag-løsning. Sanntids PCR for påvisning av A. fumigatus DNA vil bli utført ved bruk av MycoGENIE A. fumigatus sanntids PCR kit (Ademtech, Pessac, Frankrike).

AI vil bli definert som påvist eller sannsynlig aspergillose, i henhold til EORTC-kriterier.

For hver pasient vil det bli samlet inn kliniske data i hvert senter. Disse dataene inkluderer: EORTC-klassifisering, type og varighet av antifungale behandlinger, resultater av GM-tester, resultater av mykologiske kulturer og resultater av PCR-tester (positivitet og Ct-verdier). For hver pasient vil et case report form (CRF) fylles ut og overføres til undersøkelsessenteret for analyse. Sensitivitet, spesifisitet, PPV og NPV for PCR-testen vil bli beregnet.