Проспективная многоцентровая оценка набора MycoGenie для диагностики инвазивного аспергиллеза (MYCOGENIE)

Точная диагностика инвазивного аспергиллеза легких (ИЛА) у пациентов с высоким риском инвазивной грибковой инфекции остается сложной задачей из-за трудностей дифференциации ИЛА от легочных инфекций, вызванных другими плесенями или бактериями, по клиническим и рентгенологическим признакам. Таким образом, микробиологическая диагностика на основе посева имеет первостепенное значение, но требует полуинвазивных или инвазивных процедур, таких как бронхоальвеолярный лаваж (БАЛ) или биопсия иглы под контролем компьютерной томографии (КТ).

Альтернативные методы диагностики включают обнаружение биомаркеров, таких как грибковые антигены (галактоманнан Aspergillus [GM]) или ДНК, высвобождаемой гифами Aspergillus в тканях хозяина. Эти биомаркеры хорошо известны как ранние предикторы ИАЛ Недавно несколько клинических исследований по обнаружению ДНК Aspergillus в образцах из дыхательных путей или в образцах крови ясно показали диагностическую ценность этого биомаркера. Кроме того, были разработаны методологические рекомендации для протоколов ПЦР, и поступили в продажу различные стандартизированные наборы для количественной ПЦР (кПЦР) Aspergillus. Эти недавние достижения показывают, что ПЦР в настоящее время созрела для рутинного использования в клинических условиях.

Другой проблемой является возникновение аспергиллеза из-за устойчивых к азолам изолятов. О приобретенной устойчивости к азолам у A. fumigatus сообщалось с 1997 г., и она появилась во многих странах, особенно в Европе, а также на других континентах. В некоторых случаях приобретенная резистентность может быть обусловлена ​​выбором противогрибковых препаратов у пациентов, получающих длительную терапию. Тем не менее, похоже, что многие штаммы, устойчивые к азолам, возникли в окружающей среде благодаря селекции с помощью азольных фунгицидов, используемых в сельском хозяйстве. Устойчивость к азолу у A. fumigatus связана главным образом с мутациями в гене cyp51A, и среди нескольких описанных мутаций наиболее частой является мутация, включающая тандемный повтор длиной 34 п.н. (TR34) и изменение L98H. Поскольку азолы являются рекомендуемой терапией первой линии при ИПА, появление резистентности к азолам вызывает беспокойство и, как было показано, связано с повышенной частотой клинической неудачи. По этим причинам недавно было рекомендовано рутинное тестирование чувствительности клинических изолятов к противогрибковым препаратам. Тем не менее, изоляты не всегда извлекаются в культуре, особенно у пациентов с гематологическими злокачественными новообразованиями. Таким образом, молекулярное обнаружение резистентности может стать большим достижением в лечении пациентов с инвазивным аспергиллезом.

Целью этого исследования будет проверка нового набора для ПЦР в реальном времени MycoGENIE на A. fumigatus и оценка его эффективности на клинических образцах для обнаружения A. fumigatus и его устойчивости к азолам. Этот мультиплексный анализ выявляет ДНК комплекса видов A. fumigatus путем нацеливания на мультикопийный ген 28S рРНК и специфические мутации TR34 и L98H в однокопийном гене cyp51A A. fumigatus.

Исследование будет проведено у гематологических больных с высоким риском развития ИА на фоне химиотерапии. У этих пациентов двухнедельное выявление ГМ обычно проводится во всех центрах Франции. ПЦР будет проводиться на образцах, используемых для обнаружения ГМО. ДНК будет извлечена в соответствии с протоколом производителя с использованием набора MycoGENIE для раствора AutoMag. ПЦР в реальном времени для обнаружения ДНК A. fumigatus будет проводиться с использованием набора для ПЦР в реальном времени MycoGENIE A. fumigatus (Ademtech, Пессак, Франция).

AI будет определяться как подтвержденный или вероятный аспергиллез в соответствии с критериями EORTC.

Для каждого пациента клинические данные будут собираться в каждом центре. Эти данные включают: классификацию EORTC, тип и продолжительность противогрибкового лечения, результаты тестов GM, результаты микологических культур и результаты тестов ПЦР (положительные значения и значения Ct). Для каждого пациента будет заполнена форма истории болезни (CRF), которая будет передана в исследовательский центр для анализа. Будут рассчитаны чувствительность, специфичность, PPV и NPV теста ПЦР.