Prospektiv multicenterevaluering af MycoGenie-sættet til diagnosticering af invasiv aspergillose (MYCOGENIE)

Nøjagtig diagnosticering af invasiv lungeaspergillose (IPA) hos patienter med høj risiko for invasiv svampeinfektion er fortsat udfordrende på grund af vanskeligheder med at differentiere IPA fra lungeinfektioner forårsaget af andre skimmelsvampe eller bakterier på kliniske og radiologiske grunde. Derfor er kulturbaseret mikrobiologisk diagnose af primær betydning, men kræver semi-invasive eller invasive procedurer, såsom bronchoalveolar Lavage (BAL) eller computertomografi (CT)-guidet nålebiopsi.

Alternative diagnostiske metoder omfatter påvisning af biomarkører, såsom svampeantigener (Aspergillus galactomannan [GM]) eller DNA frigivet af Aspergillus-hyfer i værtsvæv. Disse biomarkører er velkendte som tidlige IPA-prædiktorer. For nylig har adskillige kliniske evalueringer til påvisning af Aspergillus DNA, enten i luftvejs- eller blodbaserede prøver, tydeligt vist den diagnostiske værdi af denne biomarkør. Derudover er der etableret metodiske anbefalinger for PCR-protokoller, og forskellige standardiserede Aspergillus kvantitative PCR (qPCR) kits er blevet kommercialiseret. Disse seneste fremskridt viser, at PCR nu er moden til rutinemæssig brug i kliniske omgivelser.

Et andet problem er fremkomsten af ​​aspergillose på grund af azol-resistente isolater. Erhvervet azolresistens hos A. fumigatus er blevet rapporteret siden 1997 og er opstået i mange lande, især i Europa, såvel som på andre kontinenter. I nogle tilfælde kan erhvervet resistens være drevet af antifungal selektion hos patienter, der modtager langtidsbehandling. Ikke desto mindre ser det ud til, at mange azol-resistente stammer stammer fra miljøet på grund af selektion af azolfungicider, der anvendes i landbruget. Azolresistens i A. fumigatus er hovedsageligt forbundet med mutationer i cyp51A-genet, og blandt flere beskrevne mutationer er den hyppigste mutation, der omfatter en 34-bp tandem-gentagelse (TR34) og L98H-ændringen. Da azoler er den anbefalede førstelinjebehandling for IPA, er fremkomsten af ​​azolresistens bekymrende og har vist sig at være forbundet med en øget frekvens af klinisk svigt. Af disse grunde er rutinemæssig antifungal modtagelighedstest af kliniske isolater blevet anbefalet for nylig. Ikke desto mindre hentes isolater ikke altid i kultur, især for patienter med hæmatologiske maligniteter. Derfor kan molekylær påvisning af resistens være et stort fremskridt i behandlingen af ​​patienter med invasiv aspergillose.

Målet med denne undersøgelse vil være at validere det nye MycoGENIE A. fumigatus real-time PCR kit og at evaluere dets ydeevne på kliniske prøver til påvisning af A. fumigatus og dets azolresistens. Dette multipleksassay detekterer DNA fra A. fumigatus-artskomplekset ved at målrette multikopi 28S rRNA-genet og specifikke TR34- og L98H-mutationer i enkeltkopinummer cyp51A-genet af A. fumigatus.

Studiet vil blive udført på hæmatologiske patienter med høj risiko for at udvikle IA under kemoterapiforløbet. Hos disse patienter udføres rutinemæssig påvisning af GM hver anden uge i alle centre i Frankrig. PCR'en vil blive udført på de prøver, der anvendes til GM-detektion. DNA vil blive ekstraheret i henhold til producentens protokol ved hjælp af MycoGENIE-sættet til AutoMag-opløsning. Real-time PCR til påvisning af A. fumigatus DNA vil blive udført ved hjælp af MycoGENIE A. fumigatus real-time PCR kit (Ademtech, Pessac, Frankrig).

AI vil blive defineret som bevist eller sandsynlig aspergillose i henhold til EORTC-kriterier.

For hver patient vil der blive indsamlet kliniske data i hvert center. Disse data omfatter: EORTC-klassificering, type og varighed af antisvampebehandlinger, resultater af GM-tests, resultater af mykologiske kulturer og resultater af PCR-test (positivitet og Ct-værdier). For hver patient udfyldes en case-rapportformular (CRF) og overføres til undersøgelsescentret til analyse. Sensitivitet, specificitet, PPV og NPV for PCR-testen vil blive beregnet.