Evaluación Multicéntrica Prospectiva del Kit MycoGenie para el Diagnóstico de Aspergilosis Invasiva (MYCOGENIE)

El diagnóstico preciso de la aspergilosis pulmonar invasiva (IPA) en pacientes con alto riesgo de infección fúngica invasiva sigue siendo un desafío debido a las dificultades para diferenciar la IPA de las infecciones pulmonares causadas por otros mohos o bacterias por motivos clínicos y radiológicos. Por lo tanto, el diagnóstico microbiológico basado en cultivos es de primordial importancia, pero requiere procedimientos semiinvasivos o invasivos, como el lavado broncoalveolar (BAL) o la biopsia con aguja guiada por tomografía computarizada (TC).

Los métodos de diagnóstico alternativos incluyen la detección de biomarcadores, como antígenos fúngicos (Aspergillus galactomannan [GM]) o el ADN liberado por las hifas de Aspergillus en los tejidos del huésped. Estos biomarcadores están bien reconocidos como predictores tempranos de IPA Recientemente, varias evaluaciones clínicas para detectar ADN de Aspergillus, ya sea en muestras respiratorias o en sangre, han demostrado claramente el valor diagnóstico de este biomarcador. Además, se han establecido recomendaciones metodológicas para los protocolos de PCR y se han comercializado diferentes kits estandarizados de PCR cuantitativa de Aspergillus (qPCR). Estos avances recientes muestran que la PCR ya está madura para su uso rutinario en entornos clínicos.

Otro problema es la aparición de aspergilosis debido a aislamientos resistentes a azoles. La resistencia adquirida a los azoles en A. fumigatus se ha informado desde 1997 y ha surgido en muchos países, particularmente en Europa, así como en otros continentes. En algunos casos, la resistencia adquirida puede ser impulsada por la selección antifúngica en pacientes que reciben terapia a largo plazo. Sin embargo, parece que muchas cepas resistentes a los azoles se originaron en el medio ambiente debido a la selección de fungicidas azoles utilizados en la agricultura. La resistencia a azoles en A. fumigatus se asocia principalmente con mutaciones en el gen cyp51A, y entre varias mutaciones descritas, la más frecuente es la mutación que comprende una repetición en tándem de 34 pb (TR34) y la alteración L98H. Dado que los azoles son el tratamiento de primera línea recomendado para la IPA, la aparición de resistencia a los azoles es preocupante y se ha demostrado que está asociada con una mayor tasa de fracaso clínico. Por estas razones, recientemente se ha recomendado la prueba de susceptibilidad antimicótica de rutina de aislados clínicos. Sin embargo, los aislamientos no siempre se recuperan en cultivo, particularmente para pacientes con neoplasias malignas hematológicas. Por lo tanto, la detección molecular de resistencia puede ser un gran avance para el manejo de pacientes con aspergilosis invasiva.

El objetivo de este estudio será validar el nuevo kit de PCR en tiempo real MycoGENIE A. fumigatus y evaluar su rendimiento en muestras clínicas para la detección de A. fumigatus y su resistencia a los azoles. Este ensayo múltiplex detecta el ADN del complejo de especies de A. fumigatus dirigiéndose al gen 28S rRNA multicopia y mutaciones específicas TR34 y L98H en el gen cyp51A de número de copia única de A. fumigatus.

El estudio se realizará en pacientes hematológicos con alto riesgo de desarrollar AI durante el curso de la quimioterapia. En estos pacientes, la detección de GM cada dos semanas se realiza de forma rutinaria en todos los centros de Francia. La PCR se realizará en las muestras utilizadas para la detección de GM. El ADN se extraerá de acuerdo con el protocolo del fabricante, utilizando el kit MycoGENIE para la solución AutoMag. La PCR en tiempo real para la detección de ADN de A. fumigatus se realizará utilizando el kit de PCR en tiempo real MycoGENIE A. fumigatus (Ademtech, Pessac, Francia).

La IA se definirá como aspergilosis probada o probable, según los criterios de la EORTC.

Para cada paciente se recogerán datos clínicos en cada centro. Estos datos incluyen: clasificación EORTC, tipo y duración de los tratamientos antifúngicos, resultados de las pruebas de GM, resultados de los cultivos micológicos y resultados de las pruebas de PCR (positividad y valores de Ct). Para cada paciente se llenará un formulario de informe de caso (CRF) y se transferirá al centro de investigación para su análisis. Se calculará la sensibilidad, especificidad, VPP y VPN de la prueba PCR.