Avaliação Multicêntrica Prospectiva do Kit MycoGenie para o Diagnóstico de Aspergilose Invasiva (MYCOGENIE)

O diagnóstico preciso de aspergilose pulmonar invasiva (API) em pacientes com alto risco de infecção fúngica invasiva permanece desafiador devido às dificuldades em diferenciar a API de infecções pulmonares causadas por outros fungos ou bactérias em bases clínicas e radiológicas. Portanto, o diagnóstico microbiológico baseado em cultura é de importância primordial, mas requer procedimentos semi-invasivos ou invasivos, como lavagem broncoalveolar (BAL) ou biópsia por agulha guiada por tomografia computadorizada (TC).

Métodos alternativos de diagnóstico incluem a detecção de biomarcadores, como antígenos fúngicos (Aspergillus galactomannan [GM]) ou DNA liberado por hifas de Aspergillus em tecidos hospedeiros. Esses biomarcadores são bem reconhecidos como preditores precoces de IPA. Recentemente, várias avaliações clínicas para detectar DNA de Aspergillus, tanto em amostras respiratórias quanto em amostras de sangue, mostraram claramente o valor diagnóstico desse biomarcador. Além disso, recomendações metodológicas foram estabelecidas para protocolos de PCR e diferentes kits padronizados de PCR quantitativo de Aspergillus (qPCR) foram comercializados. Esses avanços recentes mostram que a PCR agora está madura para uso rotineiro em ambientes clínicos.

Outra questão é o surgimento de aspergilose devido a isolados resistentes a azóis. A resistência adquirida aos azóis em A. fumigatus tem sido relatada desde 1997 e surgiu em muitos países, particularmente na Europa, bem como em outros continentes. Em alguns casos, a resistência adquirida pode ser causada pela seleção de antifúngicos em pacientes que recebem terapia de longo prazo. No entanto, parece que muitas cepas resistentes a azóis se originaram no ambiente devido à seleção por fungicidas azólicos usados ​​na agricultura. A resistência a azóis em A. fumigatus está associada principalmente a mutações no gene cyp51A, sendo que dentre as várias mutações descritas, a mais frequente é a que compreende uma repetição em tandem de 34 pb (TR34) e a alteração L98H. Uma vez que os azóis são o tratamento de primeira linha recomendado para IPA, o surgimento de resistência a azóis é preocupante e tem demonstrado estar associado a um aumento da taxa de falha clínica. Por essas razões, o teste rotineiro de suscetibilidade antifúngica de isolados clínicos tem sido recomendado recentemente. No entanto, isolados nem sempre são recuperados em cultura, particularmente para pacientes com malignidades hematológicas. Portanto, a detecção molecular de resistência pode ser um grande avanço para o manejo de pacientes com aspergilose invasiva.

O objetivo deste estudo será validar o novo kit de PCR em tempo real MycoGENIE A. fumigatus e avaliar seu desempenho em amostras clínicas para a detecção de A. fumigatus e sua resistência a azóis. Este ensaio multiplex detecta DNA do complexo de espécies de A. fumigatus visando o gene multicópia 28S rRNA e mutações específicas de TR34 e L98H no gene cyp51A de número de cópia única de A. fumigatus.

O estudo será realizado em pacientes hematológicos com alto risco de desenvolver AI durante o curso da quimioterapia. Nesses pacientes, a detecção quinzenal de GM é rotineiramente realizada em todos os centros na França. A PCR será realizada nas amostras utilizadas para detecção de GM. O DNA será extraído de acordo com o protocolo do fabricante, utilizando o kit MycoGENIE para solução AutoMag. A PCR em tempo real para a detecção de DNA de A. fumigatus será realizada utilizando o kit MycoGENIE A. fumigatus real-time PCR (Ademtech, Pessac, França).

A IA será definida como aspergilose comprovada ou provável, de acordo com os critérios da EORTC.

Para cada paciente, os dados clínicos serão coletados em cada centro. Esses dados incluem: classificação EORTC, tipo e duração dos tratamentos antifúngicos, resultados dos testes de GM, resultados de culturas micológicas e resultados de testes de PCR (positividade e valores de Ct). Para cada paciente, um formulário de relato de caso (CRF) será preenchido e transferido para o centro de investigação para análise. Sensibilidade, especificidade, VPP e VPN do teste de PCR serão calculados.