Valutazione multicentrica prospettica del kit MycoGenie per la diagnosi dell'aspergillosi invasiva (MYCOGENIE)

La diagnosi accurata dell'aspergillosi polmonare invasiva (IPA) nei pazienti ad alto rischio di infezione fungina invasiva rimane difficile a causa delle difficoltà nel differenziare l'IPA dalle infezioni polmonari causate da altre muffe o batteri su basi cliniche e radiologiche. Pertanto, la diagnosi microbiologica basata sulla coltura è di primaria importanza ma richiede procedure semi-invasive o invasive, come il lavaggio broncoalveolare (BAL) o l'agobiopsia guidata da tomografia computerizzata (TC).

Metodi diagnostici alternativi includono il rilevamento di biomarcatori, come antigeni fungini (Aspergillus galactomannan [GM]) o DNA rilasciato da Aspergillus ife nei tessuti ospiti. Questi biomarcatori sono ben riconosciuti come predittori precoci di IPA Recentemente, diverse valutazioni cliniche per rilevare il DNA di Aspergillus, sia in campioni respiratori che in campioni di sangue, hanno mostrato chiaramente il valore diagnostico di questo biomarcatore. Inoltre, sono state stabilite raccomandazioni metodologiche per i protocolli PCR e sono stati commercializzati diversi kit standardizzati per PCR quantitativa Aspergillus (qPCR). Questi recenti progressi mostrano che la PCR è ormai matura per l'uso di routine in ambito clinico.

Un altro problema è l'emergere di aspergillosi dovuta a isolati resistenti agli azoli. La resistenza agli azoli acquisita in A. fumigatus è stata segnalata dal 1997 ed è emersa in molti paesi, in particolare in Europa, così come in altri continenti. In alcuni casi, la resistenza acquisita può essere guidata dalla selezione antimicotica nei pazienti che ricevono una terapia a lungo termine. Tuttavia, sembra che molti ceppi resistenti agli azoli abbiano avuto origine nell'ambiente a causa della selezione operata dai fungicidi azolici utilizzati in agricoltura. La resistenza agli azoli in A. fumigatus è associata principalmente a mutazioni nel gene cyp51A e, tra le diverse mutazioni descritte, la più frequente è la mutazione che comprende una ripetizione tandem di 34 bp (TR34) e l'alterazione L98H. Poiché gli azoli sono il trattamento di prima linea raccomandato per l'IPA, l'emergere della resistenza agli azoli è preoccupante e ha dimostrato di essere associato a un aumento del tasso di fallimento clinico. Per questi motivi, di recente sono stati raccomandati test di sensibilità antimicotica di routine degli isolati clinici. Tuttavia, gli isolati non vengono sempre recuperati in coltura, in particolare per i pazienti con neoplasie ematologiche. Pertanto, il rilevamento molecolare della resistenza può rappresentare un importante progresso per la gestione dei pazienti con aspergillosi invasiva.

Lo scopo di questo studio sarà quello di validare il nuovo kit MycoGENIE A. fumigatus real-time PCR e di valutare le sue prestazioni su campioni clinici per il rilevamento di A. fumigatus e la sua resistenza agli azoli. Questo test multiplex rileva il DNA dal complesso di specie A. fumigatus prendendo di mira il gene multicopia 28S rRNA e specifiche mutazioni TR34 e L98H nel gene numero cyp51A a copia singola di A. fumigatus.

Lo studio sarà condotto su pazienti ematologici ad alto rischio di sviluppare IA durante il corso della chemioterapia. In questi pazienti, il rilevamento bisettimanale di GM viene eseguito di routine in tutti i centri in Francia. La PCR sarà eseguita sui campioni utilizzati per il rilevamento di GM. Il DNA verrà estratto secondo il protocollo del produttore, utilizzando il kit MycoGENIE per la soluzione AutoMag. La PCR in tempo reale per il rilevamento del DNA di A. fumigatus sarà eseguita utilizzando il kit MycoGENIE A. fumigatus PCR in tempo reale (Ademtech, Pessac, Francia).

L'IA sarà definita come aspergillosi provata o probabile, secondo i criteri EORTC.

Per ogni paziente, i dati clinici saranno raccolti in ogni centro. Questi dati includono: classificazione EORTC, tipo e durata dei trattamenti antimicotici, risultati dei test GM, risultati delle colture micologiche e risultati dei test PCR (positività e valori Ct). Per ogni paziente verrà compilato un case report form (CRF) e trasferito al centro investigativo per l'analisi. Saranno calcolate sensibilità, specificità, PPV e NPV del test PCR.