用于诊断侵袭性曲霉病的 MycoGenie 试剂盒的前瞻性多中心评估 (MYCOGENIE)

由于在临床和放射学方面难以将 IPA 与其他霉菌或细菌引起的肺部感染区分开来，因此在侵袭性真菌感染高风险患者中准确诊断侵袭性肺曲霉病 (IPA) 仍然具有挑战性。 因此，基于培养的微生物学诊断至关重要，但需要半侵入性或侵入性程序，例如支气管肺泡灌洗 (BAL) 或计算机断层扫描 (CT) 引导的穿刺活检。

替代诊断方法包括检测生物标志物，例如真菌抗原（曲霉半乳甘露聚糖 [GM]）或宿主组织中曲霉菌丝释放的 DNA。 这些生物标志物被公认为早期 IPA 预测因子 最近，在呼吸道或血液样本中检测曲霉菌 DNA 的几项临床评估清楚地显示了该生物标志物的诊断价值。 此外，已经为 PCR 协​​议建立了方法学建议，并且不同的标准化曲霉定量 PCR (qPCR) 试剂盒已经商业化。 这些最新进展表明，PCR 现在已经成熟，可以在临床环境中常规使用。

另一个问题是唑类耐药分离株引起的曲霉菌病。 自 1997 年以来已有烟曲霉获得性唑类耐药性的报道，并在许多国家出现，尤其是在欧洲以及其他大陆。 在某些情况下，获得性耐药可能是由接受长期治疗的患者选择抗真菌药物引起的。 然而，由于农业中使用的唑类杀菌剂的选择，似乎许多唑类抗性菌株起源于环境。 烟曲霉中的唑类抗性主要与 cyp51A 基因突变有关，在所描述的几种突变中，最常见的是包含 34-bp 串联重复序列 (TR34) 和 L98H 改变的突变。 由于唑类药物是 IPA 的推荐一线治疗药物，因此唑类药物耐药性的出现令人担忧，并且已被证明与临床失败率增加有关。 由于这些原因，最近建议对临床分离株进行常规抗真菌药敏试验。 然而，分离株并不总能在培养中回收，特别是对于血液系统恶性肿瘤患者。 因此，耐药性的分子检测可能是侵袭性曲霉病患者管理的重大进展。

本研究的目的是验证新的 MycoGENIE 烟曲霉实时 PCR 试剂盒，并评估其在临床样本上检测烟曲霉及其唑类耐药性的性能。 这种多重检测通过靶向烟曲霉单拷贝数 cyp51A 基因中的多拷贝 28S rRNA 基因和特定 TR34 和 L98H 突变来检测烟曲霉物种复合物中的 DNA。

该研究将在化疗过程中发生 IA 的高风险血液病患者中进行。 在这些患者中，法国所有中心每两周定期检测 GM。 PCR 将在用于 GM 检测的样本上进行。 将根据制造商的方案提取 DNA，使用用于 AutoMag 溶液的 MycoGENIE 试剂盒。 用于检测烟曲霉 DNA 的实时 PCR 将使用 MycoGENIE 烟曲霉实时 PCR 试剂盒（Ademtech，佩萨克，法国）进行。

根据 EORTC 标准，AI 将被定义为已证实或可能的曲霉病。

对于每位患者，临床数据将在每个中心收集。 这些数据包括：EORTC 分类、抗真菌治疗的类型和持续时间、GM 检测结果、真菌培养结果以及 PCR 检测结果（阳性和 Ct 值）。 将为每位患者填写一份病例报告表 (CRF)，并将其传送至调查中心进行分析。 将计算 PCR 测试的灵敏度、特异性、PPV 和 NPV。