Endometriální vnímavost u pacientek s opakovaným selháním implantace jako přípravný krok pro PET

Design studie: Nerandomizovaná klinická studie

Kritéria zařazení: ženy s anamnézou opakovaného selhání implantace s anamnézou přenosu alespoň 4 embryí dobré kvality v alespoň 3 čerstvých nebo zmrazených cyklech

• Ženy mají méně než 40 let

  • BMI (25–33)

  • Nediabetická ramena studie: 2

    1. Ženy pro přenos zmrazeného embrya nebo nový cyklus ICSI splňující předchozí kritéria (skupina studie).

    2. Kontrolní skupina fertilních pacientek (fertilní pacientky užívající lokální mechanickou antikoncepci jako referenční skupina). Pomoci při identifikaci cut-off hodnot všech příbuzných genů.

       Velikost vzorku: 60 Zásah

       Fáze 1

    1. Nedávné laboratoře (den 2 sérum FSH, LH TSH, PROLACTIN sérum E 2) během 6 ms
    2. Bílé tablety cykloprogenova 4 mg/12 h dvakrát denně
    3. Přidejte progesteron na (den 9) 600 mg denně.
    4. V den 5 zahájení progesteronu proveďte endometriální biopsii pomocí pipple endometriální sací kyrety
    5. Nepřímá imunofluorescence pomocí QRT-PCR tkáně endometria pro 11 genů nezbytných pro implantaci a udržení těhotenství. Klasifikujte EB jako pre-receptivní, receptivní a post-receptivní a naplánujte si další den transferu.
    6. Geny ke studiu: budou studovány nejdostupnější geny.
    1. Homeobox gen (HOXA-10) upregulován
    2. LIF upregulován
    3. Alfa VB3 integren a jeho ligand osteopontin jsou pozitivně detekovány
    4. ECM upregulováno
    5. Parakrinní stromální faktory, +ve (EGF (epidermální růstový faktor), EGF vázající heparin)

• VE 17 B estradiol (E2 faktory) 6- L selektin upregulovaný 7- E-kadherin (downregulovaný) 8- Intercelulární buněčné adhezní molekuly vysoce exprimované 9- Mucin 1 downregulovaný při implantaci 10- IL-6 upregulovaný 11- IL-1 a IL - 1 R upregulovaný 12- Transportér prostaglandinu (PGT) snížený ve středně pozdní sekreci. Fáze 2 7- V rameni studie Další cyklus zahájí aktivní ttt cyklus zmrazeného ET (bílá tableta Cycloprogenova dvakrát denně, poté v den 9 proveďte transvaginální US, když je tloušťka endometria větší než 9 mm, začněte progesteronem do dne 5 pro přenos zmrazených embryí nebo nový cyklus ICSI podle standardního protokolu (dlouhé nebo antagonistické protokoly podle údajů každého pacienta). poté vyberte jednu z navrhovaných léčebných metod

  1. Intrauterinní injekce lidských choriových gonadotropinů před transferem
  2. Faktor stimulující kolonie granulocytů podávaný intrauterinně (300 mcg/ml v den OP nebo podání progesteronu FET
  3. Rekombinantní LIF
  4. Nebo kombinace 1 a 2 společných opatření, která je třeba provést v jakékoli situaci
  1. Nízká dávka aspirinu 75 mg denně
  2. Steroidy 5 mg hostakortinu denně
  3. Cyklus poranění endometria před léčbou aktivním cyklem

  8- Technika QRT-PCR genů endometriální receptivity Extrakce RNA Buňky všech studovaných skupin budou lyžovány a celková RNA byla izolována pomocí RNAeasy Mini Kit (Qiagen) a dále analyzována na kvantitu a kvalitu pomocí duálního spektrofotometru Beckman (USA).

Real Time PCR (qRT-PCR) Pro kvantitativní expresi HOXA-10, LIF, Alfa VB3 integren a jeho ligand osteopontin, ECM, EGF, E2 FAKTOR, L-selektin, E-cadherin, ICAM, Mucin1, IL-6, IL1 IL-1R a PGT; bude hodnocen následující postup. 10 ng celkové RNA z každého vzorku bude použito pro syntézu cDNA reverzní transkripcí za použití vysokokapacitní cDNA reverzní transkriptázy kit (Applied Biosystem, USA). cDNA bude následně amplifikována pomocí Syber Green I PCR Master Kit (Fermentas) na 48-jamkové destičce s použitím zařízení Step One (Applied Biosystem, USA) následovně: 10 minut při 95 °C pro aktivaci enzymu a poté 40 cyklů 15 sekund při 95 °C, 20 sekund při 55 °C a 30 sekund při 72 °C pro krok amplifikace. Změny v expresi každého cílového genu budou normalizovány ve vztahu k hodnotám středního kritického prahu (CT) p-aktinu jako provozního genu metodou ACt. Použijeme 1 μM obou primerů specifických pro každý cílový gen. U všech studovaných genů bude posouzeno sekvenování DNA