Endometriumin reseptiivisyys potilailla, joilla on toistuva implantaatiohäiriö PET:n valmisteluvaiheena

Tutkimussuunnitelma: Ei-satunnaistettu kliininen tutkimus

Sisällytämiskriteerit: naiset, joilla on ollut toistuva implantaation epäonnistuminen ja vähintään 4 hyvälaatuisen alkion siirto vähintään 3 tuoreen tai pakastetun syklin aikana

• Naiset ovat alle 40-vuotiaita

  • BMI (25-33)

  • Ei-diabeettiset Tutkimushaarat: 2

    1. Naiset pakastealkionsiirtoon tai uuteen ICSI-sykliin, jotka täyttävät aiemmat kriteerit (tutkimusryhmä).

    2. Hedelmällisen potilaan kontrolliryhmä (fertiilit potilaat, jotka saavat vertailuryhmänä paikallista mekaanista ehkäisyä). Auttaa tunnistamaan kaikkien vastaavien geenien raja-arvot.

       Otoskoko: 60 Interventio

       Vaihe 1

    1. Viimeaikaiset laboratoriot (päivä 2 seerumi FSH, LH TSH, PROLACTIN seerumi E 2) 6 ms:n sisällä
    2. Valkoiset cycloprogenova-tabletit 4 mg / 12 h kahdesti / vrk
    3. Lisää progesteronia (päivä 9) 600 mg päivässä.
    4. Progesteronin aloituspäivänä 5 tee kohdun limakalvon biopsia käyttämällä pippllen kohdun limakalvon imukurettia
    5. Epäsuora immunofluoresenssi käyttämällä kohdun limakalvon kudoksen QRT-PCR:ää 11 geenille, jotka ovat välttämättömiä implantaatioon ja raskauden ylläpitämiseen. Luokittele EB pre-receptive-, vastaanottava- ja post-vastaanottoon ja suunnittele seuraava siirtopäivä.
    6. Tutkittavat geenit: tutkitaan parhaiten saatavilla olevia geenejä.
    1. Homeobox-geeni (HOXA-10) on säädelty
    2. LIF-säännelty
    3. Alfa VB3 -integreeni ja sen ligandi osteopontiini havaitaan positiivisesti
    4. ECM ylössäädetty
    5. Parakriiniset stroomatekijät, +ve (EGF (epidermaalinen kasvutekijä), hepariinia sitova EGF)

• VE 17 B estradioli (E2-tekijät) 6-L selektiini säädelty 7- E-kadheriini (alassäädelty) 8- solujenväliset soluadheesiomolekyylit voimakkaasti ilmentyvät 9- musiini 1 alas säädelty implantaatiossa 10- IL-6 lisääntynyt 11- IL-1 ja IL - 1 R:n 12-prostaglandiinikuljettaja (PGT) vähentynyt keskimyöhässä erittyessä. Vaihe 2 7- Tutkimushaarassa Seuraava sykli aloita aktiivinen ttt-sykli pakastettua ET:tä (valkoinen Cycloprogenovan tabletti kahdesti päivässä, sitten päivänä 9 tee transvaginaalinen uä, kun kohdun limakalvon paksuus on yli 9 mm, aloita progesteroni 5. päivään asti pakastealkioiden siirtoa varten tai uusi ICSI-sykli vakioprotokollan mukaan (pitkät tai antagonistiprotokollat ​​jokaisen potilastietojen mukaan). valitse sitten jokin ehdotetuista hoidoista

  1. Ihmisen koriongonadotropiinien kohdunsisäinen injektio ennen siirtoa
  2. Granulosyyttipesäkkeitä stimuloiva tekijä annettuna kohdunsisäisesti (300 mcg/ml OP-päivänä tai progesteronin antopäivänä FET
  3. Rekombinantti LIF
  4. Tai 1 ja 2 yhteisen toimenpiteen yhdistelmä joka tilanteessa
  1. Pieni annos aspiriinia 75 mg päivässä
  2. Steroidit 5 mg hostakortiinia päivässä
  3. Endometriumin vamman sykli ennen aktiivisen syklin hoitoa

  8- Kohdun limakalvon reseptiivisten geenien QRT-PCR-tekniikka RNA:n erottaminen Kaikkien tutkittujen ryhmien solut lyysataan ja kokonais-RNA eristettiin RNAeasy Mini Kitillä (Qiagen) ja analysoitiin edelleen määrän ja laadun suhteen Beckmanin kaksoisspektrofotometrillä (USA).

Reaaliaikainen PCR (qRT-PCR) HOXA-10:n, LIF:n, Alpha VB3 -integreenin ja sen ligandin osteopontiinin, ECM:n, EGF:n, E2-tekijän, L-selektiinin, E-kadheriinin, ICAM:n, Mucin1:n, IL-6:n, IL1:n kvantitatiiviseen ekspressioon IL-1R ja PGT; seuraava menettely arvioidaan. 10 ng kokonais-RNA:ta kustakin näytteestä käytetään cDNA-synteesiin käänteistranskriptiolla käyttämällä High Kapasiteetti cDNA Reverse Transcriptase -kittiä (Applied Biosystem, USA). Tämän jälkeen cDNA monistetaan Syber Green I PCR Master Kit -sarjalla (Fermentas) 48-kuoppaisella levyllä käyttäen Step One -instrumenttia (Applied Biosystem, USA) seuraavasti: 10 minuuttia 95 ºC:ssa entsyymiaktivaatiota varten, mitä seuraa 40 sykliä 15 sekuntia 95 ºC:ssa, 20 sekuntia 55 ºC:ssa ja 30 sekuntia 72 ºC:ssa vahvistusvaiheessa. Muutokset kunkin kohdegeenin ilmentymisessä normalisoidaan suhteessa Δ-aktiinin keskimääräisiin kriittisiin kynnysarvoihin (CT) kotipitogeeninä ΔΔCt-menetelmällä. Käytämme 1 µM molempia alukkeita, jotka ovat spesifisiä kullekin kohdegeenille. DNA-sekvensointi arvioidaan kaikkien tutkittujen geenien osalta