Ricettività endometriale in pazienti con fallimento di impianto ricorrente come fase preparatoria per la PET

Disegno dello studio: studio clinico non randomizzato

Criteri di inclusione: donne con anamnesi di fallimenti di impianto ricorrenti con anamnesi di trasferimento di almeno 4 embrioni di buona qualità in almeno 3 cicli freschi o congelati

• Le donne invecchiano meno di 40 anni

  • IMC (25 - 33)

  • Bracci di studio non diabetici: 2

    1. Donne per trasferimento di embrioni congelati o Nuovo ciclo ICSI che soddisfano i criteri precedenti (braccio di studio).

    2. Gruppo di controllo di paziente fertile (pazienti fertili che ricevono contraccezione meccanica locale come gruppo di riferimento). Per aiutare nell'identificazione dei valori di cut-off di tutti i geni correlati.

       Dimensione del campione: 60 Intervento

       Fase 1

    1. Laboratori recenti (giorno 2 siero FSH, LH TSH, PROLATTINA siero E 2) entro 6 ms
    2. Compresse bianche di cicloprogenova 4 mg /12 ore due volte al giorno
    3. Aggiungi progesterone il (giorno 9) 600 mg al giorno.
    4. Il giorno 5 dall'inizio del progesterone eseguire la biopsia endometriale utilizzando la curette di aspirazione endometriale pipplle
    5. Immunofluorescenza indiretta mediante QRT-PCR del tessuto endometriale per 11 geni necessari per l'impianto e il mantenimento della gravidanza. Classificare EB come pre-ricettivo, ricettivo e post-ricettivo e pianificare il giorno successivo del trasferimento.
    6. Geni da studiare: verranno studiati i geni più accessibili.
    1. Gene Homeobox (HOXA-10) sovraregolato
    2. LIF sovraregolato
    3. L'integren alfa VB3 e il suo ligando osteopontina vengono rilevati positivamente
    4. ECM sovraregolato
    5. Fattori stromali paracrini, +ve (EGF (fattore di crescita epidermico), EGF legante l'eparina)

• VE 17 B estradiolo (fattori E2) 6- L selectina sovraregolata 7- E-caderina ( sottoregolata) 8- Molecole di adesione cellulare intercellulare altamente espresse 9- Mucina 1 sottoregolata all'impianto 10- IL-6 sovraregolata 11- IL-1 e IL - 1 R sovraregolato 12- Trasportatore delle prostaglandine (PGT) ridotto nella secrezione medio-tardiva. Fase 2 7- Nel braccio dello studio Il ciclo successivo avvia il ciclo ttt attivo di ET congelato (compressa bianca di Cycloprogenova due volte al giorno, quindi al giorno 9 esegui l'ecografia transvaginale quando lo spessore dell'endometrio è superiore a 9 mm inizia il progesterone fino al giorno 5 per il trasferimento di embrioni congelati o nuovo ciclo ICSI secondo protocollo standard (protocolli lunghi o antagonisti secondo i dati di ogni paziente). quindi selezionare uno dei trattamenti suggeriti

  1. Iniezione intrauterina di gonadotropine corioniche umane prima del trasferimento
  2. Fattore stimolante le colonie di granulociti somministrato intrauterino (300 mcg/ml il giorno della somministrazione di OP o progesterone di FET
  3. LIF ricombinante
  4. Oppure combinazione di 1 e 2 Misure comuni da adottare in qualsiasi situazione
  1. Aspirina a basso dosaggio 75 mg al giorno
  2. Steroidi 5 mg di hostacortina al giorno
  3. Ciclo di lesione endometriale prima del trattamento del ciclo attivo

  8- Tecnica di QRT-PCR dei geni di ricettività endometriale Estrazione dell'RNA Le cellule di tutti i gruppi studiati saranno lisate e l'RNA totale sarà isolato con RNAeasy Mini Kit (Qiagen) e ulteriormente analizzato per quantità e qualità con doppio spettrofotometro Beckman (USA).

Real Time PCR (qRT-PCR) Per l'espressione quantitativa di HOXA-10, LIF, Alpha VB3 integren e il suo ligando osteopontina, ECM, EGF, E2 FACTOR, L-selectina, E-caderina, ICAM, Mucin1, IL-6, IL1 , IL-1R e PGT; verrà valutata la seguente procedura. 10 ng dell'RNA totale di ciascun campione saranno utilizzati per la sintesi del cDNA mediante trascrizione inversa utilizzando il kit High capacity cDNA Reverse Transcriptase (Applied Biosystem, USA). Il cDNA verrà successivamente amplificato con il Syber Green I PCR Master Kit (Fermentas) in una piastra a 48 pozzetti utilizzando lo strumento Step One (Applied Biosystem, USA) come segue: 10 minuti a 95 ºC per l'attivazione dell'enzima seguiti da 40 cicli di 15 secondi a 95ºC, 20 secondi a 55ºC e 30 secondi a 72ºC per la fase di amplificazione. I cambiamenti nell'espressione di ciascun gene target saranno normalizzati rispetto ai valori medi di soglia critica (CT) della β-actina come gene housekeeping mediante il metodo ΔΔCt. Useremo 1 μM di entrambi i primer specifici per ciascun gene bersaglio. Il sequenziamento del DNA sarà valutato per tutti i geni studiati