Endometriale ontvankelijkheid bij patiënten met terugkerend implantatiefalen als voorbereidende stap voor PET

Studieopzet: niet-gerandomiseerde klinische studie

Inclusiecriteria: vrouwen met een voorgeschiedenis van herhaald implantatiefalen met een voorgeschiedenis van terugplaatsing van ten minste 4 embryo's van goede kwaliteit in ten minste 3 verse of ingevroren cycli

• Vrouwen worden jonger dan 40 jaar

  • BMI (25 - 33)

  • Niet-diabetici Onderzoeksarmen: 2

    1. Vrouwen voor terugplaatsing van ingevroren embryo's of nieuwe ICSI-cyclus die aan eerdere criteria voldoen (studie-arm).

    2. Controlegroep van vruchtbare patiënten (vruchtbare patiënten die lokale mechanische anticonceptie krijgen als referentiegroep). Om te helpen bij het identificeren van afkapwaarden van alle verwante genen.

       Steekproefomvang: 60 Interventie

       Fase 1

    1. Recente laboratoria (dag 2 serum FSH, LH TSH, PROLACTIN serum E 2) binnen 6 ms
    2. Witte tabletten cycloprogenova 4 mg /12 uur tweemaal daags
    3. Voeg progesteron toe op (dag 9) 600 mg per dag.
    4. Voer op dag 5 van de start van progesteron een endometriumbiopsie uit met behulp van een zuigcurette van het endometrium
    5. Indirecte immunofluorescentie met behulp van QRT-PCR van het endometriumweefsel voor 11 genen die nodig zijn voor implantatie en behoud van zwangerschap. Classificeer EB als pre-receptief, receptief en post-receptief en plan de volgende dag van overdracht.
    6. Te onderzoeken genen: de meest toegankelijke genen worden bestudeerd.
    1. Homeobox-gen (HOXA-10) opgereguleerd
    2. LIF opgereguleerd
    3. Alpha VB3 integren en zijn ligand osteopontine worden positief gedetecteerd
    4. ECM opgereguleerd
    5. Paracriene stromale factoren, +ve (EGF (epidermale groeifactor), heparinebindende EGF)

• VE 17 B-oestradiol (E2-factoren) 6- L-selectine opgereguleerd 7- E-cadherine (neerwaarts gereguleerd) 8- Intercellulaire celadhesiemoleculen sterk tot expressie gebracht 9- Mucine 1 neerwaarts gereguleerd bij implantatie 10- IL-6 opgereguleerd 11- IL-1 en IL - 1 R opgereguleerde 12- Prostaglandine transporter (PGT) verlaagd in mid-late secretie. Fase 2 7- In de onderzoeksarm Volgende cyclus start actieve ttt-cyclus van bevroren ET (witte tablet van Cycloprogenova tweemaal daags en doe op dag 9 transvaginale US wanneer de dikte van het endometrium meer dan 9 mm is, start progesteron tot dag 5 voor het terugplaatsen van ingevroren embryo's of nieuwe ICSI-cyclus volgens standaardprotocol (lange of antagonistische protocollen volgens elke patiëntgegevens). kies dan een van de voorgestelde behandelingen

  1. Intra-uteriene injectie van menselijke choriongonadotrofinen vóór overdracht
  2. Granulocyt-koloniestimulerende factor intra-uterien toegediend (300 mcg / ml op de dag van OP of progesterontoediening van FET
  3. Recombinante LIF
  4. Of combinatie van 1 en 2 Gemeenschappelijke maatregelen die in elke situatie kunnen worden uitgevoerd
  1. Lage dosis aspirine 75 mg per dag
  2. Steroïden 5 mg hostacortine per dag
  3. Endometriumletselcyclus vóór actieve cyclusbehandeling

  8- Techniek van QRT-PCR van endometriumreceptiviteitsgenen RNA-extractie Cellen van alle bestudeerde groepen zullen worden gelyseerd en totaal RNA wordt geïsoleerd met RNAeasy Mini Kit (Qiagen) en verder geanalyseerd op kwantiteit en kwaliteit met Beckman dubbele spectrofotometer (VS).

Realtime PCR (qRT-PCR) Voor kwantitatieve expressie van HOXA-10, LIF, Alpha VB3 integren en zijn ligand osteopontin, ECM, EGF, E2 FACTOR, L-selectin, E-cadherin, ICAM, Mucin1, IL-6, IL1 , IL-1R en PGT; wordt de volgende procedure beoordeeld. 10 ng van het totale RNA van elk monster zal worden gebruikt voor cDNA-synthese door reverse transcriptie met behulp van de cDNA Reverse Transcriptase-kit met hoge capaciteit (Applied Biosystem, VS). Het cDNA wordt vervolgens geamplificeerd met de Syber Green I PCR Master Kit (Fermentas) in een plaat met 48 putjes met behulp van het Step One-instrument (Applied Biosystem, VS), en wel als volgt: 10 minuten bij 95 ºC voor enzymactivering gevolgd door 40 cycli van 15 seconden bij 95 ºC, 20 seconden bij 55 ºC en 30 seconden bij 72 ºC voor de amplificatiestap. Veranderingen in de expressie van elk doelwitgen zullen worden genormaliseerd ten opzichte van de gemiddelde kritische drempelwaarden (CT) van β-actine als huishoudgen door de ΔΔCt-methode. We zullen 1 μM van beide primers gebruiken die specifiek zijn voor elk doelgen. DNA-sequencing zal worden beoordeeld voor alle bestudeerde genen