Endometrie-receptivitet hos patienter med tilbagevendende implantationsfejl som et forberedende trin til PET

Studiedesign: Ikke-randomiseret klinisk forsøg

Inklusionskriterier: kvinder med historie med tilbagevendende implantationsfejl med historie med overførsel af mindst 4 embryoner af god kvalitet i mindst 3 friske eller frosne cyklusser

• Kvinder er under 40 år

  • BMI (25 - 33)

  • Ikke-diabetiker Studieretninger: 2

    1. Kvinder til frossen embryooverførsel eller ny ICSI-cyklus, der opfylder tidligere kriterier (undersøgelsesarm).

    2. Kontrolgruppe af fertil patient (fertile patienter, der modtager lokal mekanisk prævention som referencegruppe). For at hjælpe med at identificere afskæringsværdier for alle relaterede gener.

       Prøvestørrelse: 60 Intervention

       Fase 1

    1. Nylige laboratorier (dag 2 serum FSH, LH TSH, PROLACTIN serum E 2) inden for 6 ms
    2. Hvide tabletter af cycloprogenova 4 mg /12 timer to gange / dag
    3. Tilsæt progesteron på (dag 9) 600 mg pr. dag.
    4. På dag 5 af start progesteron udfører endometriebiopsi ved hjælp af pipplle endometrial sugekurette
    5. Indirekte immunfluorescens ved hjælp af QRT-PCR af endometrievævet for 11 gener, der er nødvendige for implantation og vedligeholdelse af graviditet. Klassificer EB som præ-receptive, receptive og post-receptive og planlæg næste dag for overførsel.
    6. Gener, der skal studeres: de mest tilgængelige gener vil blive studeret.
    1. Homeobox-genet (HOXA-10) opreguleret
    2. LIF opreguleret
    3. Alpha VB3 integren og dets ligand osteopontin er positivt påvist
    4. ECM opreguleret
    5. Parakrine stromale faktorer, +ve (EGF (epidermal vækstfaktor), heparinbindende EGF)

• VE 17 B østradiol (E2 faktorer) 6- L selectin opreguleret 7- E-cadherin (nedreguleret) 8- Intercellulære celleadhæsionsmolekyler højt udtrykt 9- Mucin 1 nedreguleret ved implantation 10- IL-6 opreguleret 11- IL-1 og IL - 1 R opreguleret 12- Prostaglandin transporter (PGT) reduceret i mid-sent sekretorisk. Fase 2 7- I undersøgelsesarmen Næste cyklus start aktiv ttt cyklus af frossen ET (hvid tablet af Cycloprogenova to gange dagligt, derefter på dag 9 gør transvaginal UL, når endometrietykkelsen er mere end 9 mm, start progesteron indtil dag 5 til overførsel af frosne embryoner eller ny ICSI-cyklus i henhold til standardprotokol (lange eller antagonistprotokoller i henhold til hver patientdata). vælg derefter en af ​​de foreslåede behandlinger

  1. Intrauterin injektion af humane choriongonadotropiner før overførsel
  2. Granulocytkolonistimulerende faktor givet intrauterin (300 mcg/ml på dagen for OP eller progesteron administration af FET
  3. Rekombinant LIF
  4. Eller kombination af 1 og 2 Fælles tiltag, der skal udføres i enhver situation
  1. Lav dosis aspirin 75 mg dagligt
  2. Steroider 5 mg hostacortin dagligt
  3. Endometrieskadecyklus før aktiv cyklusbehandling

  8- Teknik for QRT-PCR af gener for endometrie-receptivitet RNA-ekstraktion Celler fra alle undersøgte grupper vil blive lyseret, og totalt RNA blev isoleret med RNAeasy Mini Kit (Qiagen) og yderligere analyseret for kvantitet og kvalitet med Beckman dobbeltspektrofotometer (USA).

Real Time PCR (qRT-PCR) Til kvantitativ ekspression af HOXA-10, LIF, Alpha VB3 integren og dets ligand osteopontin, ECM, EGF, E2 FACTOR, L-selectin, E-cadherin, ICAM, Mucin1, IL-6, IL1 IL-1R og PGT; følgende procedure vil blive vurderet. 10 ng af det totale RNA fra hver prøve vil blive brugt til cDNA-syntese ved omvendt transkription ved brug af cDNA Reverse Transcriptase-kit med høj kapacitet (Applied Biosystem, USA). cDNA'et vil efterfølgende blive amplificeret med Syber Green I PCR Master Kit (Fermentas) i en 48-brønds plade ved hjælp af Step One instrumentet (Applied Biosystem, USA) som følger: 10 minutter ved 95 ºC til enzymaktivering efterfulgt af 40 cyklusser af 15 sekunder ved 95 ºC, 20 sekunder ved 55 ºC og 30 sekunder ved 72 ºC til amplifikationstrinnet. Ændringer i ekspressionen af ​​hvert målgen vil blive normaliseret i forhold til de gennemsnitlige kritiske tærskelværdier (CT) for β-actin som husholdningsgen ved ΔΔCt-metoden. Vi vil bruge 1 μM af begge primere, der er specifikke for hvert målgen. DNA-sekventering vil blive vurderet for alle undersøgte gener