复发性植入失败患者的子宫内膜容受性作为 PET 的准备步骤

研究设计：非随机临床试验

纳入标准：有反复植入失败史的女性，在至少 3 个新鲜或冷冻周期中移植过至少 4 个优质胚胎

• 40岁以下的女性

  • 体重指数 (25 - 33)

  • 非糖尿病研究组：2

    1. 符合先前标准（研究组）的冷冻胚胎移植或新 ICSI 周期的女性。

    2. 生育患者对照组（接受局部机械避孕的生育患者作为参照组）。 帮助识别所有相关基因的截止值。

       样本量：60 干预

       阶段1

    1. 最近的实验室（第 2 天血清 FSH、LH TSH、PROLACTIN 血清 E 2）在 6 毫秒内
    2. cycloprogenova 白色药片 4 mg /12 hs 两次 / 天
    3. 在（第 9 天）添加黄体酮 600 毫克/天。
    4. 在开始孕激素的第 5 天使用 pipple 子宫内膜吸引刮匙进行子宫内膜活检
    5. 使用子宫内膜组织的 QRT-PCR 间接免疫荧光检测植入和维持妊娠所必需的 11 个基因。 将 EB 分类为接受前、接受和接受后，并计划第二天的转移。
    6. 待研究的基因：将研究最容易获得的基因。
    1. 同源盒基因 (HOXA-10 ) 上调
    2. LIF上调
    3. Alpha VB3整合素及其配体骨桥蛋白阳性检测
    4. ECM上调
    5. 旁分泌基质因子，+ve（EGF（表皮生长因子），肝素结合 EGF）

• VE 17 B 雌二醇（E2 因子） 6- L 选择素上调 7- E-钙粘蛋白（下调） 8- 细胞间细胞粘附分子高表达 9- 粘蛋白 1 在着床时下调 10- IL-6 上调 11- IL-1 和 IL - 1 R 上调 12- 前列腺素转运蛋白 (PGT) 在中晚期分泌减少。 第 2 阶段 7- 在研究组中 下一个周期开始冷冻 ET 的活跃 ttt 周期（白色 Cycloprogenova 片剂，每天两次，然后在第 9 天做经阴道超声检查，当子宫内膜厚度超过 9 毫米时开始孕激素，直到第 5 天用于冷冻胚胎移植或根据标准协议的新 ICSI 周期（根据每个患者数据的长期或拮抗剂协议）。 然后选择一种建议的治疗方法

  1. 移植前宫内注射人绒毛膜促性腺激素
  2. 宫内给予粒细胞集落刺激因子（300 mcg / ml 在 OP 或 FET 黄体酮给药当天
  3. 重组LIF
  4. 或 1 和 2 的组合 在任何情况下都要采取的常用措施
  1. 低剂量阿司匹林每天 75 毫克
  2. 类固醇 5 mg hostacortin 每日
  3. 主动周期治疗前的子宫内膜损伤周期

  8-子宫内膜容受性基因的QRT-PCR技术RNA提取裂解所有研究组的细胞并用RNAeasy Mini Kit(Qiagen)分离总RNA并用Beckman双分光光度计(美国)进一步分析数量和质量。

实时 PCR (qRT-PCR) 用于定量表达 HOXA-10、LIF、Alpha VB3 整合素及其配体骨桥蛋白、ECM、EGF、E2 因子、L-选择素、E-钙粘蛋白、ICAM、Mucin1、IL-6、IL1 , IL-1R 和 PGT；将评估以下程序。 来自每个样品的 10 ng 总 RNA 将用于使用高容量 cDNA 逆转录酶试剂盒（Applied Biosystem，美国）通过逆转录合成 cDNA。 随后使用 Step One 仪器（Applied Biosystem，美国）在 48 孔板中使用 Syber Green I PCR Master Kit（Fermentas）扩增 cDNA，如下所示：在 95 ºC 下 10 分钟进行酶激活，然后进行 40 个循环95ºC 15 秒，55ºC 20 秒和 72ºC 30 秒用于扩增步骤。 每个目标基因表达的变化将通过 ΔΔCt 方法相对于作为管家基因的 β-肌动蛋白的平均临界阈值 (CT) 值进行归一化。 我们将对每个目标基因使用 1 μM 的两种引物。 将评估所有研究基因的 DNA 测序