Рецептивность эндометрия у пациенток с рецидивирующей неудачей имплантации как этап подготовки к ПЭТ

Дизайн исследования: нерандомизированное клиническое исследование.

Критерии включения: женщины с рецидивирующей неудачей имплантации в анамнезе с переносом в анамнезе не менее 4 эмбрионов хорошего качества в течение не менее 3 свежих или замороженных циклов.

• Женщины в возрасте до 40 лет

  • ИМТ (25–33)

  • Недиабетические группы исследования: 2

    1. Женщины для переноса замороженных эмбрионов или нового цикла ИКСИ, соответствующие предыдущим критериям (группа исследования).

    2. Контрольная группа фертильных пациенток (фертильные пациентки, получающие местную механическую контрацепцию в качестве контрольной группы). Чтобы помочь в определении пороговых значений всех родственных генов.

       Размер выборки: 60 Вмешательство

       Фаза 1

    1. Недавние анализы (ФСГ в сыворотке 2-й день, ТТГ ЛГ, сыворотка с пролактином E 2) в течение 6 мс
    2. Белые таблетки циклопрогенова 4 мг/12 ч 2 раза/сут.
    3. Добавить прогестерон на (9 день) 600 мг в день.
    4. На 5-й день после начала приема прогестерона сделайте биопсию эндометрия с помощью кюретки для отсасывания эндометрия.
    5. Непрямая иммунофлуоресценция с использованием QRT-PCR ткани эндометрия на 11 генов, необходимых для имплантации и сохранения беременности. Классифицируйте EB как пре-рецептивный, восприимчивый и пост-рецептивный и запланируйте перевод на следующий день.
    6. Гены для изучения: будут изучены наиболее доступные гены.
    1. Ген гомеобокса (HOXA-10) активирован
    2. LIF активируется
    3. Интегрен альфа VB3 и его лиганд остеопонтин обнаруживаются положительно.
    4. ECM с повышенной регуляцией
    5. Паракринные стромальные факторы, +ve (EGF (эпидермальный фактор роста), EGF, связывающий гепарин)

• VE 17 B-эстрадиол (факторы E2) 6- L селектин активируется 7- E-кадгерин (понижается) 8- Молекулы межклеточной адгезии высоко экспрессируются 9- Муцин 1 подавляется при имплантации 10- IL-6 активируется 11- IL-1 и IL - 1 R активировал транспортер 12-простагландина (PGT), сниженный в середине-поздней секреторной. Фаза 2 7- В группе исследования Следующий цикл Начать активный цикл ttt замороженной ЭТ (белая таблетка Циклопрогеновой два раза в день, затем на 9-й день сделать трансвагинальное УЗИ, когда толщина эндометрия превышает 9 мм, начать прогестерон до 5-го дня для переноса замороженных эмбрионов или новый цикл ИКСИ по стандартному протоколу (длинный или антагонистический протокол по данным каждого пациента). затем выберите один из предложенных методов лечения

  1. Внутриматочная инъекция хорионического гонадотропина человека перед переносом
  2. Гранулоцитарный колониестимулирующий фактор, вводимый внутриутробно (300 мкг/мл в день ОП или введение прогестерона ФЭТ
  3. Рекомбинантный ЛИФ
  4. Или комбинация 1 и 2 Общие меры, которые нужно делать в любой ситуации
  1. Низкая доза аспирина 75 мг в день
  2. Стероиды 5 мг хостакортина в день
  3. Цикл повреждения эндометрия перед лечением активным циклом

  8- Методика QRT-PCR генов рецептивности эндометрия. Выделение РНК. Клетки всех исследуемых групп будут лизированы, и общая РНК будет выделена с помощью RNAeasy Mini Kit (Qiagen), а затем проанализирована на количество и качество с помощью двойного спектрофотометра Beckman (США).

ПЦР в реальном времени (qRT-PCR) Для количественной экспрессии HOXA-10, LIF, интегрена Alpha VB3 и его лиганда остеопонтина, ECM, EGF, E2 FACTOR, L-селектина, E-кадгерина, ICAM, Mucin1, IL-6, IL1 , Ил-1Р и ПГТ; будет оцениваться следующая процедура. 10 нг общей РНК из каждого образца будут использованы для синтеза кДНК путем обратной транскрипции с использованием набора для обратной транскриптазы кДНК высокой емкости (Applied Biosystem, США). Затем кДНК амплифицируют с помощью набора Syber Green I PCR Master Kit (Fermentas) в 48-луночном планшете с использованием прибора Step One (Applied Biosystem, США) следующим образом: 10 минут при 95 ºC для активации фермента, затем 40 циклов 15 секунд при 95 ºC, 20 секунд при 55 ºC и 30 секунд при 72 ºC для этапа амплификации. Изменения в экспрессии каждого гена-мишени будут нормализованы относительно значений среднего критического порога (CT) β-актина в качестве гена домашнего хозяйства с помощью метода ΔΔCt. Мы будем использовать 1 мкМ обоих праймеров, специфичных для каждого гена-мишени. Секвенирование ДНК будет оцениваться для всех изученных генов