Receptividade endometrial em pacientes com falha recorrente de implantação como etapa preparatória para PET

Desenho do estudo: Ensaio clínico não randomizado

Critérios de inclusão: mulheres com histórico de falha de implantação recorrente com histórico de transferência de pelo menos 4 embriões de boa qualidade em pelo menos 3 ciclos frescos ou congelados

• Mulheres com menos de 40 anos

  • IMC (25 - 33)

  • Grupos de estudo não diabéticos: 2

    1. Mulheres para transferência de embriões congelados ou Novo ciclo ICSI cumprindo os critérios anteriores (braço do estudo).

    2. Grupo controle de pacientes férteis (pacientes férteis recebendo contracepção mecânica local como grupo de referência). Para ajudar na identificação de valores de corte de todos os genes relacionados.

       Tamanho da amostra: 60 Intervenções

       Fase 1

    1. Laboratórios recentes (dia 2 soro FSH, LH TSH, PROLACTINA soro E 2) dentro de 6 ms
    2. Comprimidos brancos de cicloprogenova 4 mg/12 hs duas vezes/dia
    3. Adicionar progesterona no (dia 9) 600 mg por dia.
    4. No dia 5 do início da progesterona, faça biópsia endometrial usando cureta de sucção endometrial pipplle
    5. Imunofluorescência indireta usando QRT-PCR do tecido endometrial para 11 genes necessários para implantação e manutenção da gravidez. Classifique o AME em pré-receptivo, receptivo e pós-receptivo e planeje o próximo dia da transferência.
    6. Genes a serem estudados: serão estudados os genes mais acessíveis.
    1. Gene Homeobox (HOXA-10) regulado positivamente
    2. LIF regulado positivamente
    3. Alfa VB3 integren e seu ligante osteopontina são detectados positivamente
    4. ECM regulado positivamente
    5. Fatores estromais parácrinos, +ve (EGF (fator de crescimento epidérmico), EGF de ligação à heparina)

• VE 17 B estradiol (fatores E2) 6- L selectina regulada positivamente 7- E-caderina (regulada negativamente) 8- Moléculas de adesão celular intercelular altamente expressas 9- Mucina 1 regulada negativamente na implantação 10- Regulada positivamente por IL-6 11- IL-1 e IL - 1 R upregulated 12- Transportador de prostaglandina (PGT) reduzido na secreção média-tardia. Fase 2 7- No braço do estudo No próximo ciclo, inicie o ciclo ttt ativo de ET congelado (comprimido branco de Cycloprogenova duas vezes ao dia e, no dia 9, faça US transvaginal quando a espessura endometrial for superior a 9 mm, inicie a progesterona até o dia 5 para transferência de embriões congelados ou novo ciclo de ICSI de acordo com o protocolo padrão (protocolos longos ou antagonistas de acordo com os dados de cada paciente). em seguida, selecione um dos tratamentos sugeridos

  1. Injeção intrauterina de gonadotrofinas coriônicas humanas antes da transferência
  2. Fator estimulador de colônias de granulócitos administrado intrauterina (300 mcg/ml no dia da OP ou administração de progesterona de FET
  3. LIF recombinante
  4. Ou combinação de 1 e 2 Medidas comuns a serem tomadas em qualquer situação
  1. Aspirina em dose baixa 75 mg ao dia
  2. Esteróides 5 mg de hostacortina diariamente
  3. Ciclo de lesão endometrial antes do tratamento de ciclo ativo

  8- Técnica de QRT-PCR dos genes de receptividade endometrial Extração de RNA As células de todos os grupos estudados serão lisadas e o RNA total isolado com RNAeasy Mini Kit (Qiagen) e posteriormente analisado quanto à quantidade e qualidade com espectrofotômetro duplo Beckman (EUA).

PCR em tempo real (qRT-PCR) Para expressão quantitativa de HOXA-10, LIF, alfa VB3 integren e seu ligante osteopontina, ECM, EGF, E2 FACTOR, L-selectina, E-caderina, ICAM, Mucin1, IL-6, IL1 , IL-1R e PGT; o seguinte procedimento será avaliado. 10 ng do RNA total de cada amostra serão utilizados para a síntese de cDNA por transcrição reversa usando o kit de alta capacidade cDNA Reverse Transcriptase (Applied Biosystem, EUA). O cDNA será posteriormente amplificado com o Syber Green I PCR Master Kit (Fermentas) em uma placa de 48 poços usando o instrumento Step One (Applied Biosystem, EUA) da seguinte forma: 10 minutos a 95 ºC para ativação enzimática seguido de 40 ciclos de 15 segundos a 95ºC, 20 segundos a 55ºC e 30 segundos a 72ºC para a etapa de amplificação. Alterações na expressão de cada gene alvo serão normalizadas em relação aos valores médios do limiar crítico (CT) de β-actina como gene de limpeza pelo método ΔΔCt. Usaremos 1 μM de ambos os primers específicos para cada gene alvo. O sequenciamento de DNA será avaliado para todos os genes estudados