Endometrium fogékonysága visszatérő beültetési sikertelenségben szenvedő betegeknél, mint a PET előkészítő lépése

A vizsgálat tervezése: Nem véletlenszerű klinikai vizsgálat

Bevételi kritériumok: olyan nők, akiknek a kórtörténetében visszatérő beültetési kudarc szerepel, legalább 4 jó minőségű embrió átültetése legalább 3 friss vagy fagyasztott ciklusban

• A nők életkora 40 évnél fiatalabb

  • BMI (25-33)

  • Nem cukorbetegek Vizsgálati ágak: 2

    1. Nők fagyasztott embriótranszferre vagy új ICSI ciklusra, amelyek megfelelnek a korábbi kritériumoknak (vizsgálati kar).

    2. Termékeny betegek kontrollcsoportja (referenciacsoportként helyi mechanikus fogamzásgátlásban részesülő termékeny betegek). Segít az összes kapcsolódó gén cut off értékének azonosításában.

       Mintanagyság: 60 Beavatkozás

       1. fázis

    1. Legutóbbi laborvizsgálatok (2. napi szérum FSH, LH TSH, PROLACTIN szérum E 2) 6 ms-on belül
    2. Fehér cycloprogenova tabletta 4 mg /12 óra kétszer / nap
    3. Adjon hozzá progeszteront a (9. napon) 600 mg naponta.
    4. A progeszteron elindításának 5. napján végezzen méhnyálkahártya biopsziát pipplle endometrium szívás kürettel
    5. Indirekt immunfluoreszcencia az endometrium szövet QRT-PCR segítségével 11 génre, amelyek szükségesek a beültetéshez és a terhesség fenntartásához. Osztassa az EB-t pre-receptive, receptive és post-receptive kategóriába, és tervezze meg az átadás következő napját.
    6. Vizsgálandó gének: a leginkább hozzáférhető géneket vizsgálják.
    1. A homeobox gén (HOXA-10) felszabályozott
    2. LIF felszabályozott
    3. Az alfa VB3 integrén és liganduma, az osteopontin pozitívan kimutatható
    4. ECM felfelé szabályozva
    5. Parakrin stromafaktorok, +ve (EGF (epidermális növekedési faktor), heparinkötő EGF)

• VE 17 B ösztradiol (E2 faktorok) 6- L szelektin felfelé szabályozott 7- E-cadherin (lefelé szabályozott) 8- Intercelluláris sejtadhéziós molekulák erősen expresszálódnak 9- Mucin 1 beültetéskor csökkent 10- IL-6 felfelé szabályozott 11- IL-1 és IL - 1 R felszabályozott 12- Prosztaglandin transzporter (PGT) csökkent a közép-késői szekrécióban. 2. fázis 7- A vizsgálati karban a következő ciklusban indítsa el a fagyasztott ET aktív ttt ciklusát (a Cycloprogenova fehér tabletta naponta kétszer, majd a 9. napon végezzen transzvaginális UH-t, ha az endometrium vastagsága meghaladja a 9 mm-t, indítsa el a progeszteront az 5. napig a fagyasztott embriók átviteléhez vagy új ICSI ciklus szabványos protokoll szerint (hosszú vagy antagonista protokollok minden betegadatnak megfelelően). majd válasszon egyet a javasolt kezelések közül

  1. Humán koriongonadotropinok intrauterin injekciója az átvitel előtt
  2. Granulocita telep stimuláló faktor méhen belül adva (300 mcg/ml az OP vagy progeszteron FET beadás napján
  3. Rekombináns LIF
  4. Vagy 1 és 2 közös intézkedés kombinációja, amelyet minden helyzetben meg kell tenni
  1. Alacsony dózisú aszpirin 75 mg naponta
  2. Szteroidok 5 mg hostacortin naponta
  3. Endometrium sérülési ciklus aktív ciklusú kezelés előtt

  8. Endometrium receptivitás gének QRT-PCR technikája RNS extrakció Valamennyi vizsgált csoport sejtjeit lizáljuk, és a teljes RNS-t RNAeasy Mini Kit-tel (Qiagen) izoláljuk, majd mennyiségi és minőségi szempontból tovább elemezzük Beckman kettős spektrofotométerrel (USA).

Valós idejű PCR (qRT-PCR) HOXA-10, LIF, Alpha VB3 integrén és liganduma oszteopontin, ECM, EGF, E2 FACTOR, L-szelektin, E-cadherin, ICAM, Mucin1, IL-6, IL1 kvantitatív expressziójához IL-1R és PGT; a következő eljárás kerül értékelésre. Az egyes minták teljes RNS-éből 10 ng-ot használunk fel a cDNS-szintézishez reverz transzkripcióval, nagy kapacitású cDNS reverz transzkriptáz kittel (Applied Biosystem, USA). A cDNS-t ezután Syber Green I PCR Master Kit-tel (Fermentas) amplifikáljuk egy 48 lyukú lemezen a Step One készülék (Applied Biosystem, USA) segítségével a következőképpen: 10 perc 95 ºC-on az enzimaktiváláshoz, majd 40 ciklus 15 másodperc 95 °C-on, 20 másodperc 55 °C-on és 30 másodperc 72 °C-on az amplifikációs lépéshez. Az egyes célgének expressziójában bekövetkező változásokat a ΔΔCt módszerrel normalizáljuk a β-aktin, mint házigazda gén átlagos kritikus küszöbértékéhez (CT) képest. Mindkét primerből 1 μM-ot használunk, amelyek mindegyik célgénre specifikusak. A DNS-szekvenálást minden vizsgált gén esetében értékelni fogják