Endometriereseptivitet hos pasienter med tilbakevendende implantasjonssvikt som et forberedende trinn for PET

Studiedesign: Ikke-randomisert klinisk studie

Inklusjonskriterier: kvinner med tidligere tilbakevendende implantasjonssvikt med historie med overføring av minst 4 embryoer av god kvalitet i minst 3 ferske eller frosne sykluser

• Kvinner er under 40 år

  • BMI (25–33)

  • Ikke-diabetiker Studieretninger: 2

    1. Kvinner for frossen embryooverføring eller ny ICSI-syklus som oppfyller tidligere kriterier (studiearm).

    2. Kontrollgruppe av fertil pasient (fertile pasienter som får lokal mekanisk prevensjon som referansegruppe). For å hjelpe til med å identifisere avskårne verdier for alle relaterte gener.

       Prøvestørrelse: 60 Intervensjon

       Fase 1

    1. Nylige laboratorier (dag 2 serum FSH, LH TSH, PROLACTIN serum E 2) innen 6 ms
    2. Hvite tabletter av cycloprogenova 4 mg /12 timer to ganger / dag
    3. Tilsett progesteron på (dag 9) 600 mg per dag.
    4. På dag 5 av start progesteron gjør endometriebiopsi med pipplle endometrial sugekurette
    5. Indirekte immunfluorescens ved bruk av QRT-PCR av endometrievevet for 11 gener som er nødvendige for implantasjon og vedlikehold av graviditet. Klassifiser EB som pre-reseptiv, mottakelig og postreseptiv og planlegg neste dag for overføring.
    6. Gener som skal studeres: de mest tilgjengelige genene vil bli studert.
    1. Homeobox-genet (HOXA-10) oppregulert
    2. LIF oppregulert
    3. Alpha VB3 integren og dens ligand osteopontin er positivt påvist
    4. ECM oppregulert
    5. Parakrine stromale faktorer, +ve (EGF (epidermal vekstfaktor), heparinbindende EGF)

• VE 17 B østradiol (E2 faktorer) 6- L selectin oppregulert 7- E-cadherin (nedregulert) 8- Intercellulære celleadhesjonsmolekyler høyt uttrykt 9- Mucin 1 nedregulert ved implantasjon 10- IL-6 oppregulert 11- IL-1 og IL - 1 R oppregulert 12- Prostaglandintransportør (PGT) redusert i mid-sent sekretorisk. Fase 2 7- I studiearmen Neste syklus start aktiv ttt-syklus av frossen ET (hvit tablett av Cycloprogenova to ganger daglig, deretter på dag 9 gjør transvaginal UL når endometrietykkelsen er mer enn 9 mm start progesteron til dag 5 for overføring av frosne embryoer eller ny ICSI-syklus i henhold til standardprotokoll (lange eller antagonistprotokoller i henhold til hver pasientdata). velg deretter en av de foreslåtte behandlingene

  1. Intrauterin injeksjon av humane koriongonadotropiner før overføring
  2. Granulocyttkolonistimulerende faktor gitt intrauterin (300 mcg/ml på dagen for OP eller progesteronadministrasjon av FET
  3. Rekombinant LIF
  4. Eller kombinasjon av 1 og 2 Vanlige tiltak som skal gjøres i enhver situasjon
  1. Lavdose aspirin 75 mg daglig
  2. Steroider 5 mg hostacortin daglig
  3. Endometrieskadesyklus før aktiv syklusbehandling

  8- Teknikk for QRT-PCR av endometriemottakelsesgener RNA-ekstraksjon Celler fra alle studerte grupper vil bli lysert og totalt RNA ble isolert med RNAeasy Mini Kit (Qiagen) og videre analysert for kvantitet og kvalitet med Beckman dobbeltspektrofotometer (USA).

Real Time PCR (qRT-PCR) For kvantitativ ekspresjon av HOXA-10, LIF, Alpha VB3 integren og dens ligand osteopontin, ECM, EGF, E2 FACTOR, L-selektin, E-cadherin, ICAM, Mucin1, IL-6, IL1 IL-IR og PGT; følgende prosedyre vil bli vurdert. 10 ng av det totale RNA fra hver prøve vil bli brukt til cDNA-syntese ved revers transkripsjon ved bruk av høykapasitets cDNA Reverse Transcriptase-sett (Applied Biosystem, USA). cDNA vil deretter bli amplifisert med Syber Green I PCR Master Kit (Fermentas) i en 48-brønns plate ved bruk av Step One instrumentet (Applied Biosystem, USA) som følger: 10 minutter ved 95 ºC for enzymaktivering etterfulgt av 40 sykluser med 15 sekunder ved 95 ºC, 20 sekunder ved 55 ºC og 30 sekunder ved 72 ºC for amplifikasjonstrinnet. Endringer i uttrykket av hvert målgen vil bli normalisert i forhold til de gjennomsnittlige kritiske terskelverdiene (CT) for β-aktin som husholdningsgen ved ΔΔCt-metoden. Vi vil bruke 1 μM av begge primerne spesifikke for hvert målgen. DNA-sekvensering vil bli vurdert for alle studerte gener