Empfänglichkeit des Endometriums bei Patientinnen mit rezidivierendem Implantationsversagen als vorbereitender Schritt für die PET

Studiendesign: Nicht randomisierte klinische Studie

Einschlusskriterien: Frauen mit wiederholtem Implantationsversagen in der Vorgeschichte mit Transfer von mindestens 4 Embryonen guter Qualität in mindestens 3 frischen oder gefrorenen Zyklen

• Frauen unter 40 Jahre alt

  • BMI (25 - 33)

  • Nicht-Diabetiker Studienzweige: 2

    1. Frauen für gefrorenen Embryonentransfer oder neuen ICSI-Zyklus, die die vorherigen Kriterien erfüllen (Studienarm).

    2. Kontrollgruppe fruchtbarer Patientinnen (fruchtbare Patientinnen, die als Referenzgruppe eine lokale mechanische Kontrazeption erhalten). Um bei der Identifizierung von Cut-off-Werten aller verwandten Gene zu helfen.

       Stichprobengröße: 60 Intervention

       Phase 1

    1. Aktuelle Laborwerte (Tag 2 Serum FSH, LH TSH, PROLACTIN Serum E 2) innerhalb von 6 ms
    2. Weiße Cycloprogenova-Tabletten 4 mg/12 h zweimal täglich
    3. Fügen Sie Progesteron hinzu (Tag 9) 600 mg pro Tag.
    4. Am Tag 5 des Starts mit Progesteron wird eine Endometriumbiopsie unter Verwendung einer pipplle-Endometrium-Saugkürette durchgeführt
    5. Indirekte Immunfluoreszenz mittels QRT-PCR des Endometriumgewebes für 11 Gene, die für die Implantation und Aufrechterhaltung der Schwangerschaft erforderlich sind. Klassifizieren Sie EB als prärezeptiv, rezeptiv und postrezeptiv und planen Sie den nächsten Transfertag.
    6. Zu untersuchende Gene: Die am leichtesten zugänglichen Gene werden untersucht.
    1. Homöobox-Gen (HOXA-10) hochreguliert
    2. LIF hochreguliert
    3. Alpha VB3 integren und sein Ligand Osteopontin werden positiv nachgewiesen
    4. ECM hochreguliert
    5. Parakrine Stromafaktoren, +ve (EGF (epidermaler Wachstumsfaktor), heparinbindender EGF)

• VE 17 B Estradiol (E2-Faktoren) 6- L-Selektin hochreguliert 7- E-Cadherin (herunterreguliert) 8- Interzelluläre Zelladhäsionsmoleküle stark exprimiert 9- Mucin 1 bei Implantation herunterreguliert 10- IL-6 hochreguliert 11- IL-1 und IL - 1 R hochreguliert 12- Prostaglandin-Transporter (PGT) in der mittleren bis späten Sekretion reduziert. Phase 2 7- Im Studienarm Nächster Zyklus Beginn des aktiven TTT-Zyklus mit gefrorenem ET (weiße Cycloprogenova-Tablette zweimal täglich, dann am Tag 9 transvaginaler Ultraschall, wenn die Endometriumdicke mehr als 9 mm beträgt, Beginn mit Progesteron bis Tag 5 für den Transfer von gefrorenen Embryonen oder neuer ICSI-Zyklus nach Standardprotokoll ( lange oder Antagonistenprotokolle nach allen Patientendaten ). Wählen Sie dann eine der vorgeschlagenen Behandlungen aus

  1. Intrauterine Injektion von humanen Choriongonadotropinen vor dem Transfer
  2. Granulozyten-Kolonie-stimulierender Faktor, der intrauterin verabreicht wird (300 mcg/ml am Tag der OP oder Progesteron-Verabreichung von FET
  3. Rekombinantes LIF
  4. Oder Kombination aus 1 und 2. Übliche Maßnahmen, die in jeder Situation zu treffen sind
  1. Niedrig dosiertes Aspirin 75 mg täglich
  2. Steroide 5 mg Hostacortin täglich
  3. Endometriumverletzungszyklus vor aktiver Zyklusbehandlung

  8- Technik der QRT-PCR von Endometriumrezeptivitätsgenen RNA-Extraktion Zellen aller untersuchten Gruppen werden lysiert und die Gesamt-RNA wurde mit dem RNAeasy Mini Kit (Qiagen) isoliert und weiter auf Quantität und Qualität mit Beckman Dual Spectrophotometer (USA) analysiert.

Real Time PCR (qRT-PCR) Zur quantitativen Expression von HOXA-10, LIF, Alpha VB3 integren und seinem Liganden Osteopontin, ECM, EGF, E2 FACTOR, L-Selectin, E-Cadherin, ICAM, Mucin1, IL-6, IL1 , IL-1R und PGT; Folgendes Verfahren wird bewertet. 10 ng der Gesamt-RNA aus jeder Probe werden für die cDNA-Synthese durch reverse Transkription unter Verwendung des High-capacity-cDNA-Reverse-Transcriptase-Kits (Applied Biosystem, USA) verwendet. Die cDNA wird anschließend mit dem Syber Green I PCR Master Kit (Fermentas) in einer 48-Well-Platte unter Verwendung des Step One Instruments (Applied Biosystem, USA) wie folgt amplifiziert: 10 Minuten bei 95 °C zur Enzymaktivierung, gefolgt von 40 Zyklen von 15 Sekunden bei 95 °C, 20 Sekunden bei 55 °C und 30 Sekunden bei 72 °C für den Amplifikationsschritt. Änderungen in der Expression jedes Zielgens werden relativ zu den mittleren kritischen Schwellenwerten (CT) von β-Aktin als Haushaltsgen durch das ΔΔCt-Verfahren normalisiert. Wir werden 1 μM beider Primer verwenden, die für jedes Zielgen spezifisch sind. Die DNA-Sequenzierung wird für alle untersuchten Gene bewertet