Receptywność endometrium u pacjentek z nawracającymi niepowodzeniami implantacji jako etap przygotowawczy do PET

Projekt badania: Nierandomizowane badanie kliniczne

Kryteria włączenia: kobiety z historią nawracających niepowodzeń implantacji z historią transferu co najmniej 4 zarodków dobrej jakości w co najmniej 3 cyklach świeżych lub mrożonych

• Kobiety mają mniej niż 40 lat

  • BMI (25 - 33)

  • Bez cukrzycy Zakres badań: 2

    1. Kobiety do transferu zamrożonych zarodków lub nowego cyklu ICSI spełniające poprzednie kryteria (ramię badania).

    2. Grupa kontrolna płodnych pacjentek (płodne pacjentki otrzymujące miejscową mechaniczną antykoncepcję jako grupa odniesienia). Aby pomóc w identyfikacji wartości odcięcia wszystkich powiązanych genów.

       Wielkość próby: 60 Interwencja

       Faza 1

    1. Ostatnie badania laboratoryjne ( dzień 2 surowica FSH, LH TSH , PROLAKTYNA surowica E 2) w ciągu 6 ms
    2. Białe tabletki cycloprogenova 4 mg/12 h dwa razy dziennie
    3. Dodaj progesteron (dzień 9) 600 mg dziennie.
    4. W 5 dniu rozpoczęcia progesteronu wykonaj biopsję endometrium za pomocą kirety ssącej endometrium pipplle
    5. Immunofluorescencja pośrednia metodą QRT-PCR tkanki endometrium dla 11 genów niezbędnych do zagnieżdżenia i utrzymania ciąży. Klasyfikuj EB jako przedrecepcyjne, receptywne i postrecepcyjne i zaplanuj następny dzień transferu.
    6. Geny do zbadania: zbadane zostaną najbardziej dostępne geny.
    1. Gen homeobox (HOXA-10) regulowany w górę
    2. LIF regulowany w górę
    3. Integren alfa VB3 i jego ligand osteopontyna są wykrywane pozytywnie
    4. Regulowany w górę ECM
    5. Parakrynne czynniki zrębowe, +ve (EGF (naskórkowy czynnik wzrostu), EGF wiążący heparynę)

• VE 17 B estradiol (czynniki E2) 6- Regulowana w górę selektyna L 7- E-kadheryna (regulowana w dół) 8- Cząsteczki adhezji międzykomórkowej o wysokiej ekspresji 9- Mucyna 1 regulowana w dół podczas implantacji 10- Regulowana w górę IL-6 11- IL-1 i IL - 1 R regulowany w górę 12- transporter prostaglandyn (PGT) zmniejszony w średnio-późnym sekrecji. Faza 2 7- W ramieniu badania Następny cykl rozpocząć aktywny cykl ttt zamrożonego ET (biała tabletka Cycloprogenova dwa razy dziennie, następnie w dniu 9 wykonać przezpochwowe USG, gdy grubość endometrium jest większa niż 9 mm rozpocząć progesteron do dnia 5 w celu przeniesienia zamrożonych zarodków lub nowy cykl ICSI zgodnie ze standardowym protokołem (protokoły długie lub antagonistyczne zgodnie z danymi każdego pacjenta). następnie wybierz jeden z proponowanych zabiegów

  1. Domaciczne wstrzyknięcie ludzkich gonadotropin kosmówkowych przed transferem
  2. Czynnik stymulujący tworzenie kolonii granulocytów podany domacicznie (300 mcg/ml w dniu OP lub podanie progesteronu w FET
  3. Rekombinowany LIF
  4. Lub kombinacja 1 i 2 Wspólne środki do wykonania w każdej sytuacji
  1. Niska dawka aspiryny 75 mg dziennie
  2. Sterydy 5 mg hostakortyny dziennie
  3. Cykl uszkodzenia endometrium przed aktywnym cyklem leczenia

  8- Technika QRT-PCR genów receptywności endometrium Ekstrakcja RNA Komórki wszystkich badanych grup zostaną poddane lizie i całkowity RNA zostanie wyizolowany za pomocą RNAeasy Mini Kit (Qiagen) i dalej analizowany pod względem ilości i jakości za pomocą podwójnego spektrofotometru Beckman (USA).

PCR w czasie rzeczywistym (qRT-PCR) Do ilościowej ekspresji integrenu HOXA-10, LIF, Alpha VB3 i jego ligandu osteopontyny, ECM, EGF, E2 FACTOR, L-selektyny, E-kadheryny, ICAM, Mucyny1, IL-6, IL1 , IL-1R i PGT; zostanie oceniona następująca procedura. 10 ng całkowitego RNA z każdej próbki zostanie użyte do syntezy cDNA przez odwrotną transkrypcję przy użyciu zestawu o dużej pojemności cDNA Reverse Transcriptase (Applied Biosystem, USA). cDNA zostanie następnie zamplifikowany przy użyciu zestawu Syber Green I PCR Master Kit (Fermentas) w 48-dołkowej płytce przy użyciu aparatu Step One (Applied Biosystem, USA) w następujący sposób: 10 minut w temperaturze 95°C w celu aktywacji enzymu, a następnie 40 cykli 15 sekund w 95ºC, 20 sekund w 55ºC i 30 sekund w 72ºC na etap amplifikacji. Zmiany w ekspresji każdego genu docelowego zostaną znormalizowane względem wartości średniego progu krytycznego (CT) β-aktyny jako genu podstawowego metodą ΔΔCt. Użyjemy 1 μM obu starterów specyficznych dla każdego docelowego genu. Sekwencjonowanie DNA zostanie ocenione dla wszystkich badanych genów