Réceptivité de l'endomètre chez les patientes présentant un échec d'implantation récurrent en tant qu'étape préparatoire à la TEP

Conception de l'étude : essai clinique non randomisé

Critères d'inclusion : femmes ayant des antécédents d'échec d'implantation récurrent avec des antécédents de transfert d'au moins 4 embryons de bonne qualité dans au moins 3 cycles frais ou congelés

• Femmes de moins de 40 ans

  • IMC (25 - 33)

  • Bras d'étude non diabétiques : 2

    1. Femmes pour transfert d'embryon congelé ou nouveau cycle ICSI remplissant les critères précédents (groupe d'étude).

    2. Groupe témoin de patientes fertiles (patientes fertiles recevant une contraception mécanique locale comme groupe de référence). Pour aider à l'identification des valeurs seuils de tous les gènes apparentés.

       Taille de l'échantillon : 60 interventions

       La phase 1

    1. Laboratoires récents (jour 2 sérum FSH, LH TSH, PROLACTIN sérum E 2) dans les 6 ms
    2. Comprimés blancs de cycloprogenova 4 mg/12 h 2 fois/jour
    3. Ajouter de la progestérone le (jour 9) 600 mg par jour.
    4. Au jour 5 du début de la progestérone, faire une biopsie endométriale à l'aide d'une curette d'aspiration endométriale pipplle
    5. Immunofluorescence indirecte par QRT-PCR du tissu endométrial pour 11 gènes nécessaires à l'implantation et au maintien de la grossesse. Classer EB comme pré-réceptif, réceptif et post-réceptif et planifier le lendemain du transfert.
    6. Gènes à étudier : les gènes les plus accessibles seront étudiés.
    1. Gène homéobox (HOXA-10) régulé positivement
    2. FRV régulé à la hausse
    3. L'intégren alpha VB3 et son ligand ostéopontine sont positivement détectés
    4. ECM régulé à la hausse
    5. Facteurs stromaux paracrines, +ve (EGF (facteur de croissance épidermique), EGF de liaison à l'héparine)

• VE 17 B estradiol (facteurs E2) 6- L sélectine régulée positivement 7- E-cadhérine ( régulée négativement) 8- Molécules d'adhésion cellulaire intercellulaire fortement exprimées 9- Mucine 1 régulée négativement à l'implantation 10- IL-6 régulée positivement 11- IL-1 et IL - 1 R régulé positivement 12- Transporteur de la prostaglandine (PGT) réduit dans la sécrétion mi-tardive. Phase 2 7- Dans le bras de l'étude Prochain cycle commencer le cycle ttt actif d'ET congelé (comprimé blanc de Cycloprogenova deux fois par jour puis au jour 9 faire une échographie transvaginale lorsque l'épaisseur de l'endomètre est supérieure à 9 mm commencer la progestérone jusqu'au jour 5 pour le transfert d'embryons congelés ou nouveau cycle ICSI selon le protocole standard (protocoles longs ou antagonistes selon les données de chaque patient). puis sélectionnez l'un des traitements suggérés

  1. Injection intra-utérine de gonadotrophines chorioniques humaines avant transfert
  2. Facteur de stimulation des colonies de granulocytes administré par voie intra-utérine (300 mcg/ml le jour de l'administration de l'OP ou de la progestérone du FET
  3. LIF recombinant
  4. Ou combinaison de 1 et 2 Mesures communes à prendre dans n'importe quelle situation
  1. Aspirine à faible dose 75 mg par jour
  2. Stéroïdes 5 mg d'hostacortine par jour
  3. Cycle de lésion de l'endomètre avant le traitement du cycle actif

  8- Technique de QRT-PCR des gènes de réceptivité de l'endomètre Extraction d'ARN Les cellules de tous les groupes étudiés seront lysées et l'ARN total sera isolé avec le kit RNAeasy Mini (Qiagen) et analysé en quantité et en qualité avec le double spectrophotomètre Beckman (USA).

PCR en temps réel (qRT-PCR) Pour l'expression quantitative de HOXA-10, LIF, intégren Alpha VB3 et son ligand ostéopontine, ECM, EGF, FACTEUR E2, L-sélectine, E-cadhérine, ICAM, Mucin1, IL-6, IL1 , IL-1R et PGT ; la procédure suivante sera évaluée. 10 ng de l'ARN total de chaque échantillon seront utilisés pour la synthèse d'ADNc par transcription inverse à l'aide du kit High capacity cDNA Reverse Transcriptase (Applied Biosystem, USA). L'ADNc sera ensuite amplifié avec le Syber Green I PCR Master Kit (Fermentas) dans une plaque de 48 puits à l'aide de l'instrument Step One (Applied Biosystem, USA) comme suit : 10 minutes à 95 ºC pour l'activation enzymatique suivies de 40 cycles de 15 secondes à 95 ºC, 20 secondes à 55 ºC et 30 secondes à 72 ºC pour l'étape d'amplification. Les changements dans l'expression de chaque gène cible seront normalisés par rapport aux valeurs moyennes du seuil critique (CT) de la β-actine en tant que gène domestique par la méthode ΔΔCt. Nous utiliserons 1 μM des deux amorces spécifiques de chaque gène cible. Le séquençage de l'ADN sera évalué pour tous les gènes étudiés