Receptividad Endometrial en Pacientes con Fracaso de Implantación Recurrente como Paso Preparatorio para PET

Diseño del estudio: ensayo clínico no aleatorizado

Criterios de inclusión: mujeres con antecedentes de fracaso de implantación recurrente con antecedentes de transferencia de al menos 4 embriones de buena calidad en al menos 3 ciclos frescos o congelados

• Mujeres menores de 40 años

  • IMC (25 - 33)

  • Brazos de estudio no diabéticos: 2

    1. Mujeres para transferencia de embriones congelados o Nuevo ciclo ICSI cumpliendo criterios anteriores (brazo de estudio).

    2. Grupo control de paciente fértil (pacientes fértiles que reciben anticoncepción mecánica local como grupo de referencia). Para ayudar en la identificación de los valores de corte de todos los genes relacionados.

       Tamaño de la muestra: 60 Intervención

       Fase 1

    1. Laboratorios recientes (día 2 suero FSH, LH TSH, PROLACTIN suero E 2) dentro de los 6 ms
    2. Comprimidos blancos de cicloprogenova 4 mg/12 hs dos veces al día
    3. Agregue progesterona el (día 9) 600 mg por día.
    4. En el día 5 de comenzar con la progesterona, haga una biopsia endometrial usando una cureta de succión endometrial con pepita.
    5. Inmunofluorescencia indirecta mediante QRT-PCR del tejido endometrial para 11 genes necesarios para la implantación y mantenimiento del embarazo. Clasifique la EB como pre-receptiva, receptiva y post-receptiva y planifique el próximo día de transferencia.
    6. Genes a estudiar: se estudiarán los genes más accesibles.
    1. Gen homeobox (HOXA-10) regulado al alza
    2. LIF regulado al alza
    3. Se detecta positivamente el integreno alfa VB3 y su ligando osteopontina
    4. ECM regulado al alza
    5. Factores estromales paracrinos, +ve (EGF (factor de crecimiento epidérmico), EGF de unión a heparina)

• VE 17 B estradiol (factores E2) 6- L selectina regulada al alza 7- E-cadherina (regulada a la baja) 8- Moléculas de adhesión celular intercelular altamente expresadas 9- Mucina 1 regulada a la baja en la implantación 10- IL-6 regulada al alza 11- IL-1 e IL - 1 R regulado al alza 12- Transportador de prostaglandinas (PGT) reducido en secretor medio-tardío. Fase 2 7- En el brazo de estudio Siguiente ciclo, comience el ciclo ttt activo de ET congelada (tableta blanca de Cycloprogenova dos veces al día, luego, en el día 9, realice una ecografía transvaginal cuando el grosor del endometrio sea superior a 9 mm, comience con progesterona hasta el día 5 para la transferencia de embriones congelados o Nuevo ciclo de ICSI según protocolo estándar (protocolos largos o antagonistas según datos de cada paciente). luego seleccione uno de los tratamientos sugeridos

  1. Inyección intrauterina de gonadotropinas coriónicas humanas antes de la transferencia
  2. Factor estimulante de colonias de granulocitos administrado por vía intrauterina (300 mcg/ml el día de la administración de OP o progesterona de FET)
  3. LIF recombinante
  4. O combinación de 1 y 2 Medidas comunes a realizar en cualquier situación
  1. Dosis bajas de aspirina 75 mg al día
  2. Esteroides 5 mg de hostacortina al día
  3. Ciclo de lesión endometrial antes del tratamiento de ciclo activo

  8- Técnica de QRT-PCR de genes de receptividad endometrial Extracción de ARN Se lisaron las células de todos los grupos estudiados y se aisló el ARN total con RNAeasy Mini Kit (Qiagen) y luego se analizó en cantidad y calidad con espectrofotómetro dual Beckman (EE. UU.).

Real Time PCR (qRT-PCR) Para la expresión cuantitativa de HOXA-10, LIF, Alpha VB3 integren y su ligando osteopontina, ECM, EGF, E2 FACTOR, L-selectin, E-cadherin, ICAM, Mucin1, IL-6, IL1 , IL-1R y PGT; se evaluará el siguiente procedimiento. Se utilizarán 10 ng del ARN total de cada muestra para la síntesis de ADNc mediante transcripción inversa utilizando el kit de transcriptasa inversa de ADNc de alta capacidad (Applied Biosystem, EE. UU.). El cDNA será posteriormente amplificado con el Syber Green I PCR Master Kit (Fermentas) en una placa de 48 pocillos utilizando el instrumento Step One (Applied Biosystem, USA) de la siguiente forma: 10 minutos a 95 ºC para activación enzimática seguido de 40 ciclos de 15 segundos a 95ºC, 20 segundos a 55 ºC y 30 segundos a 72 ºC para el paso de amplificación. Los cambios en la expresión de cada gen diana se normalizarán en relación con los valores medios del umbral crítico (CT) de la β-actina como gen de limpieza mediante el método ΔΔCt. Usaremos 1 μM de ambos cebadores específicos para cada gen objetivo. La secuenciación del ADN se evaluará para todos los genes estudiados