Rezistence a imunitní odpověď na Palbociclib u rakoviny prsu

Výzkumníci navrhují provést studii biomarkerů a molekulárního profilování v longitudinálně párovaných biopsiích nádoru a séru od pacientů s metastatickým karcinomem prsu (BC) s pozitivním hormonálním receptorem (HR+) léčených Palbociclibem (Palbo) v kombinaci s endokrinními terapiemi.

Vyšetřovatelé plánují získat biopsii nádoru a vzorky krve odebrané před léčbou i po progresi od 40 pacientů, u kterých se vyvinula získaná rezistence na kombinovanou léčbu Palbo + endokrinní. Všechny testy budou prováděny paralelně na vzorcích před i po ošetření, aby se identifikovaly rozdíly, které mohou odpovídat za získanou rezistenci. Hladiny cyklinu E1 a E2 budou hodnoceny pomocí IHC na biopsiích nádoru. Hladiny neuregulinu-1 budou hodnoceny testem ELISA na séru. Nádorové biopsie budou dále profilovány pomocí sekvenování celého exomu (WES) a sekvenování celého transkriptomu (RNA-Seq). Shodné vzorky krve budou podrobeny WES, aby se usnadnila detekce somatických mutací. Párové biopsie nádoru budou podrobeny imunohistochemické (IHC) analýze markerů TIL, aby bylo možné posoudit změny vyvolané Palbem. Nakonec použijeme vlastní test cirkulující nádorové DNA (ctDNA), který využívá na zakázku navržený panel pro studium Palbo získané rezistence, na analýzu 40 párů vzorků plazmy. Vlastní panel ctDNA bude rozšířen o další mutace identifikované z této studie, které udělují získanou rezistenci.

Aby bylo možné dále zhodnotit účinky léčby Palbo na intratumorální TIL, vyšetřovatelé plánují získat párovou biopsii nádoru a odpovídající krevní vzorky na začátku a ve dvou časových bodech (6 týdnů, 12 týdnů) v průběhu léčby Palbo od 20 pacientů. A vyberou pacienty s metastatickým BC, kteří vykazují stabilní onemocnění (SD) v reakci na Palbo pro biopsie nádoru, dříve než budou vědět, zda bude k dispozici biopsie po progresi. Nádorové biopsie budou podrobeny analýzám WES, RNA-Seq a IHC. Výzkumníci dále plánují kvantifikovat množství subpopulací imunitních buněk v odpovídajících krevních vzorcích pomocí průtokové cytometrie (FACS) k posouzení účinků léčby Palbo na systematickou imunitu.

Zatímco vzorky během léčby lze odebírat po 6 týdnech a 12 týdnech od zahájení léčby Palbo, u původně léčených pacientek s pozdním stádiem HR+ rakoviny prsu trvá v průměru asi 18 měsíců, než si vyvinou získanou rezistenci. Pouze odhadem 40 % případů s relapsem bude mít úspěšné biopsie kvůli nedostatku souhlasu nebo obtížně proveditelným biopsiím, jako jsou metastázy pouze v kostech. Vyšetřovatelé proto plánují uložit do 2. čtvrtletí 2018 biopsie před léčbou a vzorky krve od asi 100 pacientů, aby během 2 let shromáždili 40 biopsií po progresi jako párové páry. Sklíčka FFPE budou vyrobena ze všech biopsií nádoru, včetně 100 případů na začátku, a budou podrobena barvení H&E. Vyšetřovatelé budou detekovat a kvantifikovat TIL pomocí strojového učení a analýzy digitálního zobrazení H&E dat.