A resistência e a resposta imune ao palbociclibe no câncer de mama

Os investigadores propõem realizar um estudo de biomarcador e perfil molecular em biópsias tumorais pareadas longitudinalmente e soro de pacientes com câncer de mama (BC) metastático com receptor hormonal positivo (HR+) tratados com Palbociclibe (Palbo) em combinação com terapias endócrinas.

Os investigadores planejam obter biópsia do tumor e amostras de sangue, coletadas tanto no pré-tratamento quanto no pós-progressão, de 40 pacientes que desenvolveram resistência adquirida ao tratamento combinado Palbo + endócrino. Todos os ensaios serão conduzidos em paralelo em amostras pré e pós-tratamento para identificar diferenças que possam explicar a resistência adquirida. Os níveis de ciclina E1 e E2 serão avaliados por IHC em biópsias tumorais. Os níveis de neuregulina-1 serão avaliados por ensaio ELISA no soro. As biópsias tumorais serão posteriormente analisadas usando sequenciamento de exoma total (WES) e sequenciamento de transcritoma total (RNA-Seq). Amostras de sangue correspondentes serão submetidas ao WES para facilitar a detecção de mutações somáticas. Biópsias pareadas de tumores serão submetidas à análise imuno-histoquímica (IHC) de marcadores TIL para avaliar alterações induzidas por Palbo. Finalmente, aplicaremos o ensaio in-house circulating tumor DNA (ctDNA), que emprega um painel customizado para estudar a resistência adquirida por Palbo, para a análise de 40 pares de amostras de plasma. O painel personalizado de ctDNA será estendido para incluir mutações adicionais identificadas neste estudo que conferem resistência adquirida.

Para avaliar melhor os efeitos do tratamento com Palbo em TILs intratumorais, os pesquisadores planejam adquirir biópsia de tumor pareada e amostras de sangue correspondentes, no início e em dois momentos (6 semanas, 12 semanas) durante o curso do tratamento com Palbo, de 20 pacientes. E eles selecionarão pacientes com BC metastático que apresentam doenças estáveis ​​(SD) em resposta ao Palbo para biópsias de tumor, antes de saber se a biópsia pós-progressão estaria disponível. As biópsias tumorais serão submetidas a análises WES, RNA-Seq e IHC. Além disso, os investigadores planejam quantificar a abundância de subpopulações de células imunes nas amostras de sangue combinadas usando citometria de fluxo (FACS) para avaliar os efeitos do tratamento Palbo na imunidade sistemática.

Embora as amostras durante o tratamento possam ser coletadas após 6 semanas e 12 semanas após o início do tratamento com Palbo, leva cerca de 18 meses, em média, para que pacientes inicialmente tratados com câncer de mama HR+ em estágio avançado desenvolvam resistência adquirida. Estima-se que apenas 40% dos casos de recidiva terão biópsias bem-sucedidas devido à falta de consentimento ou biópsias difíceis de operar, como metástases apenas ósseas. Portanto, os investigadores planejam armazenar biópsias pré-tratamento e amostras de sangue de cerca de 100 pacientes até o segundo trimestre de 2018, a fim de coletar 40 biópsias pós-progressão como pares correspondentes dentro do prazo de 2 anos. Lâminas FFPE serão feitas de todas as biópsias de tumor, incluindo os 100 casos na linha de base, e sujeitas a coloração H&E. Os investigadores detectarão e quantificarão TILs por meio de aprendizado de máquina e análise de imagem digital dos dados de H&E.