La resistenza e la risposta immunitaria a Palbociclib nel cancro al seno

I ricercatori propongono di condurre uno studio sui biomarcatori e sui profili molecolari in biopsie tumorali longitudinalmente accoppiate e siero di pazienti con carcinoma mammario metastatico (BC) positivo al recettore ormonale (HR +) trattato con Palbociclib (Palbo) in combinazione con terapie endocrine.

I ricercatori hanno in programma di ottenere biopsia del tumore e campioni di sangue, prelevati sia prima del trattamento che dopo la progressione, da 40 pazienti che sviluppano resistenza acquisita al trattamento combinato Palbo + endocrino. Tutti i saggi saranno condotti in parallelo su entrambi i campioni pre e post-trattamento per identificare le differenze che possono spiegare la resistenza acquisita. I livelli di ciclina E1 ed E2 saranno valutati mediante IHC su biopsie tumorali. I livelli di neuregulina-1 saranno valutati mediante saggio ELISA su siero. Le biopsie tumorali saranno ulteriormente profilate utilizzando il sequenziamento dell'intero esoma (WES) e il sequenziamento dell'intero trascrittoma (RNA-Seq). I campioni di sangue corrispondenti saranno soggetti a WES per facilitare il rilevamento delle mutazioni somatiche. Le biopsie tumorali accoppiate saranno sottoposte all'analisi immunoistochimica (IHC) dei marcatori TIL per valutare i cambiamenti indotti da Palbo. Infine, applicheremo il test interno del DNA tumorale circolante (ctDNA), che utilizza un pannello progettato su misura per studiare la resistenza acquisita da Palbo, all'analisi di 40 coppie di campioni di plasma. Il pannello ctDNA personalizzato sarà esteso per includere ulteriori mutazioni identificate da questo studio che conferiscono resistenza acquisita.

Per valutare ulteriormente gli effetti del trattamento con Palbo sui TIL intratumorali, i ricercatori hanno in programma di acquisire una biopsia tumorale accoppiata e campioni di sangue abbinati, al basale e in due punti temporali (6 settimane, 12 settimane) durante il corso del trattamento con Palbo, da 20 pazienti. E selezioneranno pazienti con BC metastatico che presentano malattie stabili (SD) in risposta a Palbo per biopsie tumorali, prima di sapere se la biopsia post-progressione sarebbe disponibile. Le biopsie tumorali saranno soggette ad analisi WES, RNA-Seq e IHC. Inoltre, i ricercatori hanno in programma di quantificare l'abbondanza di sottopopolazioni di cellule immunitarie nei campioni di sangue abbinati utilizzando la citometria a flusso (FACS) per valutare gli effetti del trattamento con Palbo sull'immunità sistematica.

Mentre i campioni durante il trattamento possono essere raccolti dopo 6 settimane e 12 settimane dall'inizio del trattamento con Palbo, occorrono in media circa 18 mesi affinché le pazienti inizialmente trattate con carcinoma mammario in stadio avanzato HR+ sviluppino una resistenza acquisita. Si stima che solo il 40% dei casi di recidiva avrà biopsie riuscite a causa della mancanza di consenso o di biopsie difficili da operare come le metastasi solo ossee. Pertanto, gli investigatori prevedono di archiviare biopsie pre-trattamento e campioni di sangue di circa 100 pazienti entro il secondo trimestre del 2018 al fine di raccogliere 40 biopsie post-progressione come coppie abbinate entro il periodo di 2 anni. I vetrini FFPE saranno realizzati da tutte le biopsie tumorali, inclusi i 100 casi al basale, e soggetti a colorazione H&E. Gli investigatori rileveranno e quantificheranno i TIL attraverso l'apprendimento automatico e l'analisi delle immagini digitali dei dati H&E.