Die Resistenz und Immunantwort auf Palbociclib bei Brustkrebs

Die Forscher schlagen vor, eine Biomarker- und molekulare Profiling-Studie an gepaarten Längsschnitt-Tumorbiopsien und Serum von Patienten mit Hormonrezeptor-positivem (HR+) metastasierendem Brustkrebs (BC) durchzuführen, die mit Palbociclib (Palbo) in Kombination mit endokrinen Therapien behandelt wurden.

Die Forscher planen, von 40 Patienten, die eine erworbene Resistenz gegen die Palbo + endokrine Kombinationsbehandlung entwickeln, eine Tumorbiopsie und Blutproben zu erhalten, die sowohl vor als auch nach der Progression entnommen wurden. Alle Assays werden parallel an Proben vor und nach der Behandlung durchgeführt, um Unterschiede zu identifizieren, die für erworbene Resistenzen verantwortlich sein könnten. Die Cyclin E1- und E2-Spiegel werden vom IHC anhand von Tumorbiopsien bestimmt. Die Neuregulin-1-Spiegel werden durch einen ELISA-Assay im Serum bestimmt. Tumorbiopsien werden mittels Whole-Exome Sequencing (WES) und Whole-Transcriptome Sequencing (RNA-Seq) weiter profiliert. Passende Blutproben werden WES unterzogen, um den Nachweis somatischer Mutationen zu erleichtern. Gepaarte Tumorbiopsien werden einer immunhistochemischen (IHC) Analyse von TIL-Markern unterzogen, um Palbo-induzierte Veränderungen zu beurteilen. Schließlich werden wir den intern zirkulierenden Tumor-DNA-Test (ctDNA) anwenden, der ein speziell entwickeltes Panel zur Untersuchung der durch Palbo erworbenen Resistenz verwendet, um 40 Paare von Plasmaproben zu analysieren. Das kundenspezifische ctDNA-Panel wird um zusätzliche Mutationen erweitert, die in dieser Studie identifiziert wurden und eine erworbene Resistenz verleihen.

Um die Auswirkungen der Palbo-Behandlung auf intratumorale TILs weiter zu evaluieren, planen die Forscher, von 20 Patienten gepaarte Tumorbiopsien und übereinstimmende Blutproben zu Studienbeginn und zu zwei Zeitpunkten (6 Wochen, 12 Wochen) im Verlauf der Palbo-Behandlung zu entnehmen. Und sie werden metastasierende BC-Patienten auswählen, die stabile Erkrankungen (SD) als Reaktion auf Palbo für Tumorbiopsien aufweisen, bevor bekannt ist, ob eine Postprogressionsbiopsie verfügbar wäre. Tumorbiopsien werden WES-, RNA-Seq- und IHC-Analysen unterzogen. Darüber hinaus planen die Forscher, die Häufigkeit von Immunzell-Subpopulationen in den übereinstimmenden Blutproben mittels Durchflusszytometrie (FACS) zu quantifizieren, um die Auswirkungen der Palbo-Behandlung auf die systematische Immunität zu bewerten.

Während 6 Wochen und 12 Wochen nach Beginn der Palbo-Behandlung Proben während der Behandlung entnommen werden können, dauert es im Durchschnitt etwa 18 Monate, bis Patientinnen mit HR+ Brustkrebs im Spätstadium eine erworbene Resistenz entwickeln. Nur bei schätzungsweise 40 % der Rückfallfälle werden erfolgreiche Biopsien aufgrund fehlender Zustimmung oder schwierig zu handhabender Biopsien, wie z. B. reiner Knochenmetastasen, durchgeführt. Daher planen die Forscher, bis zum zweiten Quartal 2018 Biopsien und Blutproben von etwa 100 Patienten vor der Behandlung zu speichern, um innerhalb des 2-Jahres-Zeitraums 40 Biopsien nach der Progression als übereinstimmende Paare zu sammeln. FFPE-Objektträger werden von allen Tumorbiopsien hergestellt, einschließlich der 100 Fälle zu Studienbeginn, und einer H&E-Färbung unterzogen. Die Ermittler werden TILs durch maschinelles Lernen und digitale Bildanalyse der H&E-Daten erkennen und quantifizieren.