La resistencia y la respuesta inmunitaria a palbociclib en el cáncer de mama

Los investigadores proponen realizar un estudio de biomarcadores y perfiles moleculares en biopsias tumorales pareadas longitudinalmente y suero de pacientes con cáncer de mama (CM) metastásico con receptor hormonal positivo (HR+) tratados con Palbociclib (Palbo) en combinación con terapias endocrinas.

Los investigadores planean obtener una biopsia del tumor y muestras de sangre, tomadas antes del tratamiento y después de la progresión, de 40 pacientes que desarrollen resistencia adquirida al tratamiento combinado con Palbo + endocrino. Todos los ensayos se realizarán en paralelo en muestras previas y posteriores al tratamiento para identificar diferencias que puedan explicar la resistencia adquirida. Los niveles de ciclina E1 y E2 se evaluarán mediante IHC en biopsias de tumores. Los niveles de neurregulina-1 se evaluarán mediante ensayo ELISA en suero. Las biopsias tumorales se perfilarán aún más mediante la secuenciación del exoma completo (WES) y la secuenciación del transcriptoma completo (RNA-Seq). Las muestras de sangre coincidentes estarán sujetas a WES para facilitar la detección de mutaciones somáticas. Las biopsias de tumores emparejados se someterán a un análisis de inmunohistoquímica (IHC) de los marcadores TIL para evaluar los cambios inducidos por Palbo. Por último, aplicaremos el ensayo interno de ADN tumoral circulante (ctDNA), que emplea un panel diseñado a medida para estudiar la resistencia adquirida por Palbo, hacia el análisis de 40 pares de muestras de plasma. El panel de ctDNA personalizado se ampliará para incluir mutaciones adicionales identificadas a partir de este estudio que confieren resistencia adquirida.

Para evaluar más a fondo los efectos del tratamiento con Palbo en los TIL intratumorales, los investigadores planean obtener una biopsia de tumor pareada y muestras de sangre coincidentes, al inicio y en dos momentos (6 semanas, 12 semanas) durante el curso del tratamiento con Palbo, de 20 pacientes. Y seleccionarán pacientes con CM metastásico que muestren enfermedades estables (SD) en respuesta a Palbo para biopsias tumorales, antes de saber si la biopsia posterior a la progresión estaría disponible. Las biopsias tumorales estarán sujetas a análisis WES, RNA-Seq e IHC. Además, los investigadores planean cuantificar la abundancia de subpoblaciones de células inmunitarias en las muestras de sangre emparejadas mediante citometría de flujo (FACS) para evaluar los efectos del tratamiento con Palbo en la inmunidad sistemática.

Si bien las muestras durante el tratamiento se pueden recolectar después de 6 semanas y 12 semanas de iniciar el tratamiento con Palbo, las pacientes tratadas inicialmente con cánceres de mama HR+ en etapa tardía tardan aproximadamente 18 meses en promedio en desarrollar resistencia adquirida. Se estima que solo el 40% de los casos recidivantes tendrán biopsias exitosas debido a la falta de consentimiento o biopsias difíciles de operar, como metástasis solo óseas. Por lo tanto, los investigadores planean almacenar biopsias previas al tratamiento y muestras de sangre de aproximadamente 100 pacientes para el segundo trimestre de 2018 con el fin de recolectar 40 biopsias posteriores a la progresión como pares emparejados dentro del marco de tiempo de 2 años. Los portaobjetos FFPE se realizarán a partir de todas las biopsias de tumores, incluidos los 100 casos al inicio, y se someterán a tinción con H&E. Los investigadores detectarán y cuantificarán los TIL a través del aprendizaje automático y el análisis de imágenes digitales de los datos de H&E.