Hojení ran u zdravých dobrovolníků

Pozadí a odůvodnění Kůže hraje klíčovou roli v ochraně, kde působí jako bariéra před poškozením a patogeny mezi vnějším a vnitřním prostředím. Rány ohrožují jeho ochrannou roli tím, že narušují funkci a normální strukturu kůže a pod ní ležící měkké tkáně. Jako reakce na poranění dochází k hojení rány s cílem rychle obnovit defekt. Tento proces zahrnuje aktivaci, mimo jiné, keratinocytů, fibroblastů, endoteliálních buněk, makrofágů a krevních destiček a skládá se z mnoha fází včetně hemostázy, zánětu, migrace a buněčné proliferace a zrání a remodelace. Zjednodušené schéma průběhu hojení ran je znázorněno na obrázku 2. Vzhledem k širokému zapojení různých typů buněk, extracelulární matrix a mnoha reaktivních molekul každá fáze hojení ran produkuje charakteristické změny ve tkáni. Nedostatek v jakékoli části procesu může vést k opožděnému hojení ran, abnormální tvorbě jizev nebo chronickým ranám.

Ke studiu hojení ran u zdravých dobrovolníků byl již dříve v literatuře popsán testovací model s kožními biopsiemi. Charakterizace tohoto modelu však nebyla provedena komplexně, protože byla vynechána pokročilá analýza biopsií. Kromě toho analýzy provedené v předchozích studiích pouze částečně popsaly procesy hojení ran buď nedostatečnými časovými body pro charakterizaci nebo omezeným současným hodnocením více modalit hojení ran. Navíc nové neinvazivní zobrazovací metodologie včetně termografie, 3D fotografie, multispektrálního zobrazování umožňují komplexnější profilování morfologie rány.

Celkovým cílem této studie je vyvinout standardizovaný model k dočasnému a lokálnímu vyvolání kožního traumatu za účelem vyšetření hojení ran a monitorování uzavření rány. Tento klinický model umožní budoucí použití jako proof-of-pharmacology a proof-of concept studie, stejně jako profilování léčiv v raných programech vývoje léčiv. Přesněji řečeno, cílem studie je prozkoumat a charakterizovat indukci dobře definovaného kožního traumatu a přirozeného procesu hojení ran v průběhu různých fází pomocí řady dermatologických hodnocení po biopsiích kůže u zdravých dobrovolníků. Dále bude posouzena bezpečnost a snášenlivost.

Charakterizace a sledování účinků hojení ran po biopsiích kožních punčů bude prováděno pomocí biofyzikálních, biochemických, zobrazovacích, klinických parametrů a sledovaných výsledků.

Cíl(e) Primární cíl

• Charakterizovat a monitorovat hojení ran po standardizovaném, indukovaném kožním traumatu Sekundární cíle
• Hodnocení bezpečnosti a snášenlivosti biopsií vyvolaného kožního traumatu Design Toto je observační studie s jedním centrem a jedním ramenem. Ošetření Místa biopsie budou ošetřena sekundárním léčebným záměrem s nepřilnavým gázovým obvazem a po 48 hodinách bez léčby.

Zkoušený lék Neaplikovatelné Srovnávací lék V této studii nebude použit žádný srovnávací lék. Období studie Celková doba trvání studie bude přibližně 14 týdnů: 4 týdny pro screening a 10 týdnů pozorování. Subjekty navštíví CHDR 14krát.

Subjekty/skupiny Plánuje se zapsat celkem 18 zdravých dobrovolníků. Studie bude zahrnovat 1 kohortu s randomizovanou dobou odběru opakované biopsie. Každému dobrovolníkovi budou v den 0 odebrány tři kožní biopsie (3 mm) spodní části zad se vzdáleností přibližně 3-5 cm mezi nimi. Všechny bioptické léze budou ošetřeny gázovým obvazem (Jelonet®, parafínová gáza + Tegaderm®) po dobu 48 hodin, poté se gáza odstraní. Poté zůstanou bioptické léze neléčené. Jeden vzorek biopsie odebraný v den 0 bude sloužit jako základní měření pro opakované vzorky týkající se histologie, imunohistochemie a sekvenování RNA (RNA-seq) nebo hodnocení reverzní transkripční polymerázové řetězové reakce (qRT-PCR) v reálném čase.

Opakované biopsie ze stejného místa jako v den 0 budou odebírány 7., 14. nebo 21. den (náhodná bioptická léze a den) a 28., 42. nebo 56. den (bioptická léze a randomizovaný den) u všech subjektů. Observační biopsie (náhodná biopsie léze) bude sloužit jako primární biopsie a bude následovat pro všechna měření. Všechny opakované bioptické léze budou také ošetřeny gázovým obvazem (Jelonet®, parafínová gáza + Tegaderm®) po dobu 48 hodin, poté se gáza odstraní a zahájí se pozorování.

Skupina: 1 Období pozorování (den 2 – den 70): 3 biopsie odebrané v den 0

• 1 opakovaná biopsie odebraná 7., 14. nebo 21. den (randomizovaná)
• 1 opakovaná biopsie odebraná 28., 42. nebo 56. den (randomizovaná)
• 1 cílová (primární) biopsie k pozorování bez reexcize Počet subjektů: 18

Kritéria pro zařazení

Způsobilé subjekty musí při screeningu splňovat všechna následující kritéria pro zařazení:

1. Zdraví jedinci ve věku 18 až 30 let (včetně). Zdravotní stav se ověřuje nepřítomností důkazů o jakémkoli klinicky významném aktivním nebo nekontrolovaném chronickém onemocnění po podrobné anamnéze, kompletním fyzikálním vyšetření včetně vitálních funkcí, hematologickém, chemickém a virologickém odběru krve, rozboru moči, vyšetření moči a kotininu, a dechové zkoušky na alkohol. V případě nejistých nebo pochybných výsledků mohou být testy provedené během screeningu před randomizací zopakovány, aby se potvrdila způsobilost, nebo mohou být posouzeny jako klinicky irelevantní pro zdravé subjekty.
2. Index tělesné hmotnosti (BMI) mezi 18 a 30 kg/m2 včetně
3. Fitzpatrick typ kůže I-II (kavkazský typ).
4. Způsobilé pro provádění biopsií dolní části zad (žádný nadměrný růst ochlupení, žádné místní kožní poruchy)
5. Ochotný dát písemný informovaný souhlas a ochotný a schopný dodržovat protokol studie.

Kritéria vyloučení

Způsobilé subjekty nesmí při screeningu splňovat žádné z následujících kritérií vyloučení:

1. Anamnéza patologické tvorby jizev (keloidní, hypertrofické jizvy)
2. Jakákoli forma tělesné modifikace dolní části zad bránící odběru biopsie nezměněné kůže (např. tetování, piercing, implantáty)
3. Jakékoli onemocnění spojené s poškozením imunitního systému, včetně autoimunitních onemocnění, HIV a pacientů po transplantaci.
4. Požadavek imunosupresivní nebo imunomodulační medikace, včetně glukokortikoidů, nesteroidních protizánětlivých léků (NSAID) a chemoterapeutických léků do 30 dnů před zařazením nebo plánovaného použití v průběhu studie.
5. Máte jakékoli aktuální a/nebo opakující se patologicky, klinicky významné kožní onemocnění.
6. Použití topických léků (na předpis nebo volně prodejných (OTC)) do 30 dnů od zahájení studie.in oblast místního ošetření.
7. Těhotná, pozitivní těhotenský test, záměr otěhotnět nebo kojení.
8. Současný kuřák a/nebo pravidelný uživatel jiných produktů obsahujících nikotin (např. náplastí).
9. Průměrná spotřeba více než 14 jednotek alkoholu za týden
10. Opalování v důsledku opalování, nadměrného slunění nebo solária do 3 týdnů od zápisu nebo plánovaného opalování v průběhu studie
11. Účast na výzkumné studii léku nebo zařízení během 3 měsíců před screeningem nebo více než 4krát ročně.
12. Ztráta nebo darování krve nad 500 ml během tří měsíců před screeningem.
13. Jakýkoli (zdravotní) stav, který by podle názoru zkoušejícího mohl potenciálně ohrozit bezpečnost nebo shodu subjektu nebo by mohl subjektům bránit v úspěšném dokončení klinického hodnocení.

Doprovodné léky Žádné léky na předpis nebo OTC léky (kromě multivitaminů) nebudou povoleny během 21 dnů před začátkem studie nebo méně než 5 poločasů (podle toho, co je delší) a v průběhu studie. Výjimkou je paracetamol (do 4 g/den) při lokální bolesti. Použití léků proti bolesti určí zkoušející individuálně. Ostatní výjimky budou učiněny pouze tehdy, bude-li zdůvodnění prodiskutováno a jasně zdokumentováno.

Koncové body

• Bioptické biomarkery:

  • Histologie s barvením hematoxylinem a eosinem (HE).
  • Imunohistochemie s biomarkery souvisejícími s hojením ran (např. CD31, kolagen I, kolagen III, aSMA, fibronektin)
  • RNA-seq nebo qRT-PCR pro biomarkery související s hojením ran (např. VEGFα, TGFβ1, TGFβ2, TGFβ3, PDGF, CTGF, TNF, IL-1B, IL-4, GM-CSF, IL-6, IL-10, MMP1, MMP3, OSM, LOX)
• Lokální kožní biomarkery pro biomarkery související s hojením ran (např. VEGF-A, TNFα, IL-8, TLSP, MMP-3, IL-4) pomocí transdermální analytické náplasti (TAP)
• Klinické zobrazování (např. 2D a 3D fotografie, termografie, laserové tečkované kontrastní zobrazování (LSCI), transepidermální ztráta vody (TEWL), kolorimetrie)
• Klinické hodnocení (stupnice hodnocení erytému, stupnice hodnocení ran červená-žlutá-černá (RYB), stupnice hodnocení jizev pacienta a pozorovatele (POSAS))
• Kožní mikrobiom (zdravé a bioptické léze) Koncové body snášenlivosti / bezpečnosti
• Nežádoucí příhody (AE)
• Lokální tolerance (stupnice hodnocení erytému, škála hodnocení rány RYB, POSAS, svědění a bolest NRS) Všechna výše uvedená farmakodynamická a bezpečnostní měření budou během studie prováděna několikrát podle plánu návštěv a hodnocení.

Velikost vzorku Odůvodnění Bude zkoumána celková velikost kohorty 18 zdravých dobrovolníků. To je oprávněné, protože primárním cílem je prozkoumat a monitorovat model hojení ran. Vzhledem k průzkumnému charakteru studie nebyl proveden žádný formální výpočet síly.

Statistická metodika Pro farmakodynamiku a bezpečnostní opatření budou uvedeny seznamy dat a průměry.

Vzhledem k průzkumnému charakteru studie budou farmakodynamické cílové parametry primárně analyzovány pomocí deskriptivní statistiky. Všechny farmakodynamické koncové body budou shrnuty (průměr a standardní odchylka průměru, medián, minimální a maximální hodnoty) podle času a budou také prezentovány graficky jako průměr v čase, se standardní odchylkou jako chybové úsečky. Ve všech souhrnech dat budou použity nominální výsledky, logaritmicky transformované výsledky a změny od výchozích výsledků. Všechny kategorické farmakodynamické koncové body budou shrnuty podle četností.