Guarigione delle ferite in volontari sani

Contesto e fondamento logico La pelle svolge un ruolo fondamentale nella protezione in quanto funge da barriera da danni e agenti patogeni tra l'ambiente esterno e quello interno. Le ferite compromettono il suo ruolo protettivo interrompendo la funzione e la normale struttura della pelle e dei tessuti molli sottostanti. Come risposta alla lesione, si verifica la guarigione della ferita per ripristinare rapidamente il difetto. Questo processo comporta l'attivazione, tra gli altri, di cheratinociti, fibroblasti, cellule endoteliali, macrofagi e piastrine e consiste in più fasi tra cui emostasi, infiammazione, migrazione e proliferazione cellulare, maturazione e rimodellamento. Uno schema semplificato del corso della guarigione della ferita è illustrato nella Figura 2. A causa dell'ampio coinvolgimento di vari tipi di cellule, della matrice extracellulare e di molte molecole reattive, ogni fase della guarigione della ferita produce cambiamenti caratteristici all'interno del tessuto. Una carenza in qualsiasi parte del processo può portare a guarigione ritardata della ferita, formazione di cicatrici anormali o ferite croniche.

Per studiare la guarigione delle ferite in volontari sani è stato precedentemente descritto in letteratura un modello di sfida con biopsie cutanee. Tuttavia, la caratterizzazione di questo modello non è stata eseguita in modo completo poiché l'analisi avanzata delle biopsie è stata omessa. Inoltre, le analisi eseguite in studi precedenti hanno descritto solo parzialmente i processi di guarigione delle ferite, sia per punti temporali insufficienti per la caratterizzazione sia per scarse valutazioni simultanee di molteplici modalità di guarigione delle ferite. Inoltre, nuove metodologie di imaging non invasive, tra cui la termografia, la fotografia 3D e l'imaging multispettrale, consentono una profilazione più completa della morfologia della ferita.

Lo scopo generale di questo studio è quello di sviluppare un modello standardizzato per indurre temporaneamente e localmente un trauma cutaneo per studiare la guarigione della ferita e monitorare la chiusura della ferita. Questo modello clinico consentirà l'applicazione futura come studi proof-of-pharmacology e proof-of-concept, nonché profili di farmaci nei primi programmi di sviluppo di farmaci. Più specificamente, l'obiettivo della sperimentazione è esplorare e caratterizzare l'induzione di un trauma cutaneo ben definito e il processo di guarigione naturale della ferita nel corso delle diverse fasi utilizzando una batteria di valutazioni dermatologiche dopo biopsie cutanee in volontari sani. Inoltre, saranno valutate la sicurezza e la tollerabilità.

La caratterizzazione e il monitoraggio degli effetti di cicatrizzazione delle ferite a seguito di biopsie con punch cutaneo saranno eseguiti mediante parametri biofisici, biochimici, di imaging, clinici e risultati riferiti dal soggetto.

Obiettivo(i) Obiettivo primario

• Caratterizzare e monitorare la guarigione della ferita dopo un trauma cutaneo indotto standardizzato Obiettivi secondari
• Per valutare la sicurezza e la tollerabilità del trauma cutaneo indotto dalla biopsia Design Questo è uno studio osservazionale, a centro singolo, a braccio singolo. Trattamenti I siti di biopsia saranno trattati per intenzione di guarigione secondaria con una medicazione di garza antiaderente seguita da nessun trattamento dopo 48 ore.

Farmaco sperimentale Non applicabile Farmaco di confronto In questo studio non verrà utilizzato alcun farmaco di confronto. Periodi di studio La durata totale dello studio sarà di circa 14 settimane: 4 settimane per lo screening e 10 settimane di osservazione. I soggetti visiteranno CHDR 14 volte.

Soggetti/gruppi È previsto l'arruolamento di un totale di 18 volontari sani. Lo studio comporterà 1 coorte con un tempo di raccolta della biopsia ripetuto randomizzato. Tre biopsie cutanee (3 mm) della parte bassa della schiena verranno prelevate da ciascun volontario il giorno 0, con una distanza di circa 3-5 cm tra loro. Tutte le lesioni bioptiche saranno trattate con una garza (Jelonet®, garza di paraffina + Tegaderm®) per 48 ore dopodiché la garza viene rimossa. In seguito, le lesioni bioptiche rimarranno non trattate. Un campione di biopsia prelevato il giorno 0 servirà come misurazione di base per i campioni ripetuti riguardanti l'istologia, l'immunoistochimica e il sequenziamento dell'RNA (RNA-seq) o le valutazioni della reazione a catena della polimerasi della trascrizione inversa in tempo reale (qRT-PCR).

Biopsie ripetute della stessa posizione del giorno 0 verranno prelevate il giorno 7, 14 o 21 (lesione bioptica e giorno randomizzato) e il giorno 28, 42 o 56 (lesione bioptica e giorno randomizzato) per tutti i soggetti. La biopsia di osservazione (lesione bioptica randomizzata) servirà come biopsia primaria e seguita per tutte le misurazioni. Tutte le lesioni da biopsia ripetuta verranno trattate anche con una medicazione in garza (Jelonet®, garza di paraffina + Tegaderm®) per 48 ore, dopodiché la garza viene rimossa e inizia l'osservazione.

Coorte: 1 Periodo di osservazione (giorno 2 - giorno 70): 3 biopsie prelevate il giorno 0

• 1 biopsia ripetuta eseguita il giorno 7, 14 o 21 (randomizzata)
• 1 biopsia ripetuta eseguita il giorno 28, 42 o 56 (randomizzata)
• 1 biopsia target (primaria) per osservazione senza ri-escissione Numero di soggetti: 18

Criterio di inclusione

I soggetti idonei devono soddisfare tutti i seguenti criteri di inclusione allo screening:

1. Soggetti sani, di età compresa tra 18 e 30 anni (inclusi). Lo stato di salute è verificato dall'assenza di evidenza di qualsiasi malattia cronica attiva o non controllata clinicamente significativa a seguito di un'anamnesi dettagliata, un esame fisico completo che includa segni vitali, prelievo di sangue di ematologia, chimica e virologia, analisi delle urine, droga delle urine e test della cotinina, e alcol test del respiro. In caso di risultati incerti o discutibili, i test eseguiti durante lo screening possono essere ripetuti prima della randomizzazione per confermare l'idoneità o essere giudicati clinicamente irrilevanti per i soggetti sani.
2. Indice di massa corporea (BMI) compreso tra 18 e 30 kg/m2, inclusi
3. Fitzpatrick Tipo di pelle I-II (tipo caucasico).
4. Parte bassa della schiena idonea per eseguire biopsie (nessuna crescita eccessiva di peli, nessun disturbo cutaneo locale)
5. - Disposto a fornire il consenso informato scritto e disposto e in grado di rispettare il protocollo di studio.

Criteri di esclusione

I soggetti idonei non devono soddisfare nessuno dei seguenti criteri di esclusione allo screening:

1. Storia di formazione di cicatrici patologiche (cheloidi, cicatrici ipertrofiche)
2. Qualsiasi forma di modificazione corporea della parte bassa della schiena che ostacoli il prelievo bioptico di pelle inalterata (ad es. tatuaggi, piercing, impianti)
3. Qualsiasi malattia associata a compromissione del sistema immunitario, comprese le malattie autoimmuni, l'HIV e i pazienti trapiantati.
4. Requisito di farmaci immunosoppressivi o immunomodulatori, inclusi glucocorticoidi, farmaci antinfiammatori non steroidei (FANS) e farmaci chemioterapici entro 30 giorni prima dell'arruolamento o pianificati per l'uso durante il corso dello studio.
5. Avere qualsiasi condizione della pelle rilevante patologicamente, clinicamente significativa attuale e / o ricorrente.
6. Uso di farmaci topici (prescrizione o da banco (OTC)) entro 30 giorni dall'inizio dello studio.in zona di trattamento locale.
7. Incinta, test di gravidanza positivo, intenzione di rimanere incinta o allattamento.
8. Fumatore attuale e/o utilizzatore abituale di altri prodotti contenenti nicotina (ad es. cerotti).
9. Consumo medio di oltre 14 unità di alcol a settimana
10. Abbronzatura dovuta a prendere il sole, eccessiva esposizione al sole o cabina abbronzante entro 3 settimane dall'iscrizione o prevista durante il corso dello studio
11. Partecipazione a uno studio sperimentale su farmaci o dispositivi entro 3 mesi prima dello screening o più di 4 volte l'anno.
12. Perdita o donazione di sangue superiore a 500 ml entro tre mesi prima dello screening.
13. Qualsiasi condizione (medica) che, a giudizio dello sperimentatore, possa potenzialmente compromettere la sicurezza o la compliance del soggetto o possa precludere il completamento con successo della sperimentazione clinica da parte del soggetto.

Farmaci concomitanti Nessun farmaco su prescrizione o farmaci da banco (esclusi i multivitaminici) sarà consentito entro 21 giorni prima dell'inizio dello studio, o meno di 5 emivite (a seconda di quale sia il più lungo) e durante il corso dello studio. Le eccezioni sono il paracetamolo (fino a 4 g/die) in caso di dolore locale. L'uso di antidolorifici sarà determinato dallo sperimentatore individualmente. Altre eccezioni saranno fatte solo se la motivazione è discussa e chiaramente documentata.

Endpoint

• Biomarcatori della biopsia:

  • Istologia con colorazione con ematossilina ed eosina (HE).
  • Immunoistochimica con biomarcatori correlati alla guarigione della ferita (ad es. CD31, collagene I, collagene III, aSMA, fibronectina)
  • RNA-seq o qRT-PCR per biomarcatori correlati alla guarigione delle ferite (ad es. VEGFα, TGFβ1, TGFβ2, TGFβ3, PDGF, CTGF, TNF, IL-1B, IL-4, GM-CSF, IL-6, IL-10, MMP1, MMP3, OSM, LOX)
• Biomarcatori cutanei locali per biomarcatori correlati alla guarigione delle ferite (ad es. VEGF-A, TNFα, IL-8, TLSP, MMP-3, IL-4) mediante patch di analisi transdermica (TAP)
• Imaging clinico (ad es. Fotografia 2D e 3D, termografia, imaging a contrasto laser speckle (LSCI), perdita di acqua transepidermica (TEWL), colorimetria)
• Valutazione clinica (scala di classificazione dell'eritema, scala di valutazione della ferita rosso-giallo-nero (RYB), scala di valutazione della cicatrice del paziente e dell'osservatore (POSAS))
• Microbioma cutaneo (lesioni sane e biopsie) Endpoint di tollerabilità/sicurezza
• Eventi avversi (EA)
• Tolleranza locale (scala di classificazione dell'eritema, scala di valutazione della ferita RYB, POSAS, NRS prurito e dolore) Tutte le misurazioni farmacodinamiche e di sicurezza sopra menzionate verranno eseguite più volte durante lo studio secondo il programma di visita e valutazione.

Giustificazione della dimensione del campione Verrà esaminata una dimensione totale della coorte di 18 volontari sani. Ciò è giustificato poiché l'obiettivo primario è quello di esplorare e monitorare il modello di guarigione della ferita. Non è stato eseguito alcun calcolo formale della potenza dato il carattere esplorativo dello studio.

Metodologia statistica Saranno presentati elenchi di dati e medie per la farmacodinamica e le misure di sicurezza.

Dato il carattere esplorativo dello studio, gli endpoint farmacodinamici saranno analizzati principalmente utilizzando statistiche descrittive. Tutti gli endpoint farmacodinamici saranno riepilogati (media e deviazione standard dei valori medio, mediano, minimo e massimo) per tempo e saranno anche presentati graficamente come media nel tempo, con deviazione standard come barre di errore. In tutti i riepiloghi dei dati verranno utilizzati sia i risultati nominali che i risultati trasformati in logaritmi e la variazione rispetto ai risultati del basale. Tutti gli endpoint farmacodinamici categorici saranno riassunti per frequenze.