Vliv zánětu na hodnocení stavu mikroživin

Pozadí:

Subklinické nedostatky mikroživin zůstávají skrytým aspektem podvýživy, pro který chybí komplexní údaje. Definování subklinických nedostatků mikroživin vyžaduje zvážení prevalence zánětu a jeho důsledků pro interpretaci nedostatků mikroživin na základě hodnocení biochemických indikátorů. Tato studie poskytne komplexní profil stavu mikroživin a antimikrobiální rezistence u kohorty malých dětí žijících v hustě obydlených městských slumech.

Hypotéza:

I. Zánět může ovlivnit několik biochemických měření, která se běžně používají k interpretaci stavu mikroživin u dětí II. Stanovení mikroživin lze úspěšně provádět pomocí vzorků krve z prstu/paty pomocí mikrovzorkovačů, čímž se usnadní odběr krve a sníží se náklady na skladování v chladu a transport do analytické laboratoře.

Specifické cíle:

Naším primárním cílem je zkoumat účinky zánětu na několik biochemických měření používaných k interpretaci stavu mikroživin u dětí. Naším sekundárním cílem je otestovat použitelnost zařízení na krevní skvrny umožňující stanovení stavu mikroživin v terénu. Naším výzkumným cílem je provést srovnávací analýzu genů střevní antimikrobiální rezistence (AMR) a profilu rezistomu u dětí.

Metody:

Této studie se zúčastní celkem 40 kojenců (ve věku 9-18 měsíců). V této studii budou výzkumníci používat dva různé stabilní izotopové vitaminy A, např. 13C10-retinylacetát a 13C4-retinylacetát. 400 μg těchto izotopů rozpuštěných v 0,5 ml slunečnicového oleje bude poskytnuto přímo do úst dítěte pomocí pipety s přímou výměnou. Matky budou požádány, aby kojily své dítě po perorálním podání, aby se zvýšila absorpce značeného vitaminu A. Specifická aktivita 13C10- a 13C4-retinylacetátu ve vzorcích krve bude měřena kapalinovou chromatografií-tandemovou hmotnostní spektrometrií (LC/MS/MS ). V den odběru krve budou použity 24hodinové dietní dotazníky a týdenní dotazníky o morbiditě. Vyšetřovatelé budou také používat vakcíny PENTA jako prostředek k vyvolání kontrolovaného zánětu (což napodobuje přirozenou infekci). PENTA je kombinací pěti různých antigenů vakcíny (hepatitida B (HBV)/ Haemophilus influenza typu b (Hib) / tetanus-záškrt-celobuněčný černý kašel (TDwP)). Toto očkování je pro kojence prospěšné, protože Světová zdravotnická organizace doporučuje přeočkovací dávku. Na konci studie budou vakcíny PENTA poskytnuty také studovaným kojencům ve skupině „bez vakcíny“.

V den 0 dostanou všichni kojenci (n=40) orální dávku 13C10-retinylacetátu a 4. den budou odebrány vzorky krve (5 ml). V den 7 dostanou všichni kojenci (n=40) další perorální dávka 13C4-retinylacetátu. O 3 dny později náhodně vybraných 30 kojenců dostane vakcíny PENTA (10. den), zatímco dalších 10 kojenců nedostane žádné vakcíny. 24 hodin po vakcinaci bude od kojenců ve očkované skupině odebrán vzorek krve z prstu pro měření CRP (QuikRead go, Orion, Finsko). Ve stejný den (den 11) budou odebrány vzorky krve (5 ml) od kojenců, u kterých se vyvinul zánět (CRP > 5 mg/l) ve skupině vakcíny a také od kojenců v kontrolní skupině (den 11). Odhady plazmatických mikroživin a zásob vitaminu A 4. a 11. den tedy vyhodnotí účinky zánětu na indikátory stavu plazmatických mikronutrientů a celkovou tělesnou zásobu vitaminu A. Krevní mikrovzorkovače budou testovány spolu s odběrem žilní krve, aby se posoudila proveditelnost odběru vzorků z prstu/paty. Budou odebírány vzorky stolice, místní povrchové vody a vzorky odpadních vod za účelem testování prevalence AMR rezitomů u dětí a jejich prostředí.

Měření výsledku/proměnné:

1. Následující plazmatické biomarkery budou odhadnuty před zánětem a 24 hodin po zánětu

   • Markery zánětu: C-reaktivní protein (CRP) (mg/l) a α1-kyselý glykoprotein (AGP) (g/l)
   • Indikátory stavu vitaminu A: retinol (nmol/l), celkové tělesné zásoby vitaminu A (nmol), protein vázající retinol (RBP) (mg/l) a beta-karoten (nmol/l)
   • Indikátory stavu železa: feritin (ug/l) a rozpustný transferinový receptor (mg/l)
   • Stavové indikátory folátů/B12: folát (nmol/l), kyselina methylmalonová (umol/l) a kobalamin (pmol/l)
   • Indikátory stavu stopových prvků: selen (ug/L), měď (ug/L) a tyreoglobulin (ug/L).
2. Užitečnost zařízení pro mikrovzorkování pro odběr vzorků krve pro budoucí hodnocení mikroživin.
3. Posouzení a kontrast hojnosti a diverzity genu AMR za účelem vytvoření rezistorů