Wpływ stanu zapalnego na ocenę stanu mikroelementów

Tło:

Subkliniczne niedobory mikroskładników odżywczych pozostają ukrytym aspektem niedożywienia, dla którego brakuje kompleksowych danych. Zdefiniowanie subklinicznych niedoborów mikroskładników odżywczych wymaga uwzględnienia częstości występowania stanu zapalnego i jego implikacji dla interpretacji niedoborów mikroskładników odżywczych na podstawie oceny wskaźników biochemicznych. Badanie to zapewni kompleksowy profil stanu mikroelementów i oporności na środki przeciwdrobnoustrojowe w kohorcie małych dzieci mieszkających w gęsto zaludnionych miejskich slumsach.

Hipoteza:

I. Zapalenie może wpływać na kilka pomiarów biochemicznych, które są powszechnie stosowane do interpretacji stanu mikroelementów u dzieci II. Oceny mikroskładników odżywczych można z powodzeniem przeprowadzać przy użyciu próbek krwi pobranych z palca/pięty za pomocą mikrosamplerów, zwiększając w ten sposób łatwość pobierania krwi i zmniejszając koszty przechowywania w chłodni i transportu do laboratorium analitycznego.

Konkretne cele:

Naszym głównym celem jest zbadanie wpływu stanu zapalnego na kilka pomiarów biochemicznych stosowanych do interpretacji statusu mikroelementów u dzieci. Naszym drugorzędnym celem jest przetestowanie przydatności urządzenia do oznaczania mikroelementów w warunkach polowych. Naszym celem eksploracyjnym jest dokonanie analizy porównawczej genów oporności na środki przeciwdrobnoustrojowe w jelitach (AMR) i profilu rezystomu u dzieci.

Metody:

W badaniu weźmie udział łącznie 40 niemowląt (w wieku 9-18 miesięcy). W tym badaniu badacze użyją dwóch różnych stabilnych izotopów witaminy A, np. octanu 13C10-retinylu i octanu 13C4-retinylu. 400 μg tych izotopów, rozpuszczonych w 0,5 ml oleju słonecznikowego, zostanie podane bezpośrednio do ust niemowlęcia za pomocą bezpośredniej wymiennej pipety. Matki zostaną poproszone o karmienie piersią dziecka po podaniu dawki doustnej w celu zwiększenia wchłaniania znakowanej witaminy A. Specyficzna aktywność octanu 13C10- i 13C4-retinylu w próbkach krwi będzie mierzona za pomocą chromatografii cieczowej z tandemową spektrometrią mas (LC/MS/MS ). W dniu pobrania krwi zostanie wykorzystany 24-godzinny wywiad żywieniowy oraz tygodniowe kwestionariusze zachorowalności. Badacze wykorzystają również szczepionki PENTA jako środek do wywołania kontrolowanego stanu zapalnego (blisko naśladującego naturalną infekcję). PENTA jest kombinacją pięciu różnych antygenów szczepionkowych (wirusowe zapalenie wątroby typu B (HBV)/Haemophilus influenza typu b (Hib)/tężec-błonica-pełnokomórkowy krztusiec (TDwP)). Szczepienie to jest korzystne dla niemowląt, ponieważ Światowa Organizacja Zdrowia zaleca dawkę przypominającą szczepionki. Pod koniec badania szczepionki PENTA zostaną również podane badanym niemowlętom z grupy „nieszczepionej”.

W dniu 0 wszystkie niemowlęta (n=40) otrzymają doustną dawkę octanu 13C10-retinylu, a próbki krwi (5 ml) zostaną pobrane w dniu 4. W dniu 7 wszystkie niemowlęta (n=40) otrzymają także kolejną doustna dawka octanu 13C4-retinylu. 3 dni później losowo wybrane 30 niemowląt otrzyma szczepionki PENTA (dzień 10), podczas gdy pozostałe 10 niemowląt nie otrzyma żadnych szczepionek. 24 godziny po szczepieniu od niemowląt w grupie szczepionej zostanie pobrana próbka krwi z palca w celu zmierzenia CRP (QuikRead go, Orion, Finlandia). Tego samego dnia (dzień 11) zostaną pobrane próbki krwi (5 ml) od niemowląt, u których rozwinął się stan zapalny (CRP > 5 mg/l) w grupie szczepionej, a także od niemowląt w grupie kontrolnej (dzień 11). Tak więc szacunki dotyczące mikroskładników odżywczych w osoczu i zapasów witaminy A w dniu 4 i 11 pozwolą ocenić wpływ stanu zapalnego na wskaźniki statusu mikroskładników odżywczych w osoczu i całkowity zapas witaminy A w organizmie. Mikropróbki krwi będą testowane wraz z pobieraniem krwi żylnej w celu oceny wykonalności pobierania próbek z palca/pięty. Zostaną pobrane próbki kału, lokalnych wód powierzchniowych i próbek ścieków w celu zbadania częstości występowania resitomów opornych na środki przeciwdrobnoustrojowe u dzieci i ich otoczenia.

Miary/zmienne wyniku:

1. Następujące biomarkery w osoczu zostaną oszacowane przed zapaleniem i 24 godziny po zapaleniu

   • Markery stanu zapalnego: białko C-reaktywne (CRP) (mg/l) i kwaśna glikoproteina α1 (AGP) (g/l)
   • Wskaźniki statusu witaminy A: retinol (nmol/l), całkowite zapasy witaminy A w organizmie (nmol), białko wiążące retinol (RBP) (mg/l) i beta-karoten (nmol/l)
   • Wskaźniki stanu żelaza: ferrytyna (ug/l) i rozpuszczalny receptor transferyny (mg/l)
   • Wskaźniki stanu kwasu foliowego/B12: kwas foliowy (nmol/l), kwas metylomalonowy (umol/l) i kobalamina (pmol/l)
   • Wskaźniki statusu pierwiastków śladowych: selen (ug/l), miedź (ug/l) i tyreoglobulina (ug/l).
2. Przydatność urządzenia do mikropróbkowania do pobierania próbek krwi do przyszłych ocen mikroskładników odżywczych.
3. Ocena i kontrast obfitości i różnorodności genów AMR w celu opracowania oporności