Corifollitropin Alfa a morfokinetika embryí

Morfokinetické parametry vývoje embrya byly intenzivně zkoumány. Malá pozornost však byla věnována vlivu ovariální stimulace na morfokinetické parametry. Gryshenko a kol. zjistili významný rozdíl v době čtvrtého buněčného dělení (t5) embryí získaných po řízené ovariální hyperstimulaci v protokolech dlouhých agonistů GnRH a antagonistů GnRH. Dále bylo zjištěno, že vyšší dávky gonadotropinu zpomalují vývoj embryí.

Cílem této studie je tedy prozkoumat vliv corifollitropinu alfa (Elonva) na morfokinetiku embrya a výsledek léčby fertility ve srovnání s kontrolní skupinou stimulovanou Follitropinem beta (Puregon). Výzkumníci předpokládají, že existují rozdíly v morfokinetickém chování embryí v rámci různých stimulačních protokolů.

Retrospektivně bude analyzováno celkem 742 embryí od 215 různých pacientek trpících neplodností podstupujících ovariální stimulaci přípravkem Elonva a celkem 5148 embryí od 1136 pacientek podstupujících ovariální stimulaci přípravkem Puregon. Pro vyloučení faktorů prostředí bude hodnocení rozlišovat mezi embryi kultivovanými při 21% kyslíku a embryi se sníženými podmínkami kyslíku (5% kyslíku) v embryoskopu. Skupiny budou odpovídat věku a BMI.

Všechny ženy zahrnuté do studie podstoupily protokol antagonisty GnRH (Gonadotropin-releasing hormone) kontrolovanou ovariální hyperstimulaci. Pacienti dostávali rekombinantní lidský folikuly stimulující hormon (Elonva; MSD Sharp & Dohme GMBH, Puregon; MSD Sharp & Dohme GMBH). ELONVA byla podávána po dobu 7 dnů s následným podáváním Puregonu (MSD Sharp & Dohme GMBH) pro případ další potřeby stimulace. Puregon byl podáván po dobu 8-10 dnů s přizpůsobením dávkování podle věku, hmotnosti, sérové ​​koncentrace antimulleriánského hormonu (sAMH) a hormonálního stavu. Transvaginální sonografie byla provedena po 5 dnech stimulace a následně každý druhý den až do dne odběru oocytů. Ultrasonografické měření bylo provedeno pomocí RIC 5-9-D 4D intravaginální sondy ultrazvukového přístroje GE Voluson E8 BT09 (oba od GE Healthcare Austria GmbH). Antagonista GnRH (Cetrotide, Merck KGaA) byl injikován, aby se zabránilo předčasné ovulaci. Spouštění bylo zahájeno 35 hodin před odběrem oocytů, podáno 5000-10 000 IU lidského choriového gonadotropinu (hCG) subkutánně (Pregnyl, NV Organon), s přizpůsobením dávkování podle tělesné hmotnosti pacientky.

Folikuly větší než 10 mm v průměru byly odsáty pod sedací (Propofol, Fresenius Kabi Austria GmbH; Rapifen, Janssen-Cilag Pharma GmbH) a transvaginálním ultrazvukovým vedením (GE Healthcare Austria GmbH). Folikulární tekutina (FF) byla vyšetřena na oocyty za konstantních podmínek 37 °C na IVF pracovní stanici L24E s vyhřívacím stupněm (K-SYSTEMS Kivex Biotec A/S). Intracytoplazmatická injekce spermie (ICSI) byla provedena u všech oocytů metafáze II (MII) 4-5 hodin po odběru oocytů podle našeho standardního operačního postupu u obou skupin pacientů.

Po odebrání oocytů a oplodnění byly oocyty kultivovány v univerzálním kultivačním médiu (Gynemed Medizinprodukte GmbH & Co. KG, Německo). Po 14-16 h byla provedena kontrola hnojení. Všechna normální oplodněná embrya se dvěma pronukley (PN) byla poté kultivována pomocí misek Embryoslide v časosběrném inkubátoru Embryoscope® (oba Vitrolife AB, Švédsko). Pomocí vestavěné kamery a mikroskopu byly snímky vyvíjejícího se embrya pořizovány každých 15 minut v sedmi různých vrstvách. Definice morfokinetických parametrů byla provedena podle kritérií navržených Ciray et al. a byla analyzována pomocí softwaru vyvinutého pro analýzu časosběrného obrazu (software Embryoviewer®; Vitrolife AB, Švédsko).