Corifollitropina alfa e morfocinetica embrionale

I parametri morfocinetici dello sviluppo embrionale sono stati intensamente studiati. Tuttavia, poca attenzione è stata prestata all'influenza della stimolazione ovarica sui parametri morfocinetici. Gryshenko et al. trovato una differenza significativa nel quarto tempo di divisione cellulare (t5) degli embrioni ottenuti dopo l'iperstimolazione ovarica controllata nei protocolli agonisti del GnRH lungo e antagonista del GnRH. Inoltre, è stato riscontrato che dosi più elevate di gonadotropine rallentano lo sviluppo degli embrioni.

Pertanto, lo scopo di questo studio è quello di indagare l'influenza della corifollitropina alfa (Elonva) sulla morfocinetica dell'embrione e sull'esito del trattamento della fertilità rispetto a un gruppo di controllo stimolato con Follitropina beta (Puregon). I ricercatori ipotizzano che vi siano differenze nel comportamento morfocinetico degli embrioni all'interno dei diversi protocolli di stimolazione.

Saranno analizzati retrospettivamente un totale di 742 embrioni di 215 diverse pazienti affette da infertilità sottoposte a stimolazione ovarica con Elonva e un totale di 5148 embrioni di 1136 pazienti sottoposte a stimolazione ovarica con Puregon. Per escludere fattori ambientali, la valutazione distinguerà tra embrioni coltivati ​​con il 21% di ossigeno ed embrioni con condizioni di ossigeno ridotte (5% di ossigeno) nell'embrioscopio. I gruppi saranno abbinati per età e BMI.

Tutte le donne incluse nello studio sono state sottoposte a iperstimolazione ovarica controllata dal protocollo dell'antagonista del GnRH (ormone di rilascio delle gonadotropine). I pazienti hanno ricevuto ormone follicolo-stimolante umano ricombinante (Elonva; MSD Sharp & Dohme GMBH, Puregon; MSD Sharp & Dohme GMBH). ELONVA è stato somministrato per 7 giorni con successiva somministrazione di Puregon (MSD Sharp & Dohme GMBH) in caso di ulteriore necessità di stimolazione. Puregon è stato somministrato per 8-10 giorni con adattamento del dosaggio in base all'età, al peso, alla concentrazione sierica dell'ormone antimulleriano (sAMH) e allo stato ormonale. L'ecografia transvaginale è stata eseguita dopo 5 giorni di stimolazione, seguita ogni due giorni fino al giorno del prelievo degli ovociti. La misurazione ecografica è stata eseguita utilizzando una sonda intravaginale RIC 5-9-D 4D di un ecografo GE Voluson E8 BT09 (entrambi di GE Healthcare Austria GmbH). L'antagonista del GnRH (Cetrotide, Merck KGaA) è stato iniettato per evitare l'ovulazione prematura. Il triggering è stato avviato 35 ore prima del prelievo degli ovociti, somministrato con 5000-10.000 UI di gonadotropina corionica umana (hCG) per via sottocutanea (Pregnyl, N.V. Organon), con adattamento del dosaggio in base al peso corporeo del paziente.

I follicoli di diametro superiore a 10 mm sono stati aspirati sotto sedazione (Propofol, Fresenius Kabi Austria GmbH; Rapifen, Janssen-Cilag Pharma GmbH) e guida ecografica transvaginale (GE Healthcare Austria GmbH). Il fluido follicolare (FF) è stato esaminato per gli ovociti in condizioni costanti di 37 °C in una stazione di lavoro per fecondazione in vitro L24E con stadio di riscaldamento (K-SYSTEMS Kivex Biotec A/S). L'iniezione intracitoplasmatica di spermatozoi (ICSI) è stata eseguita su tutti gli ovociti in metafase II (MII) 4-5 ore dopo il prelievo degli ovociti secondo la nostra procedura operativa standard in entrambi i gruppi di pazienti.

Dopo il recupero e la fecondazione degli ovociti, gli ovociti sono stati coltivati ​​in terreno di coltura universale (Gynemed Medizinprodukte GmbH & Co. KG, Germania). Dopo 14-16 h è stato eseguito il controllo della fecondazione. Tutti gli embrioni normali fecondati con due pronuclei (PN) sono stati quindi coltivati ​​utilizzando piatti Embryoslide nell'incubatore time-lapse Embryoscope® (entrambi Vitrolife AB, Svezia). Con la fotocamera e il microscopio integrati, le immagini dell'embrione in via di sviluppo sono state scattate ogni 15 minuti in sette diversi strati. La definizione dei parametri morfocinetici è stata effettuata secondo i criteri proposti da Ciray et al. ed è stato analizzato con un software sviluppato per l'analisi delle immagini time-lapse (software Embryoviewer®; Vitrolife AB, Svezia).