Koryfolitropina Alfa i morfokinetyka zarodka

Morfokinetyczne parametry rozwoju zarodka były intensywnie badane. Jednak niewiele uwagi poświęcono wpływowi stymulacji jajników na parametry morfokinetyczne. Gryszenko i in. stwierdzili istotną różnicę w czasie czwartego podziału komórkowego (t5) zarodków uzyskanych po kontrolowanej hiperstymulacji jajników w protokołach z długimi agonistami GnRH i antagonistami GnRH. Ponadto stwierdzono, że wyższe dawki gonadotropin spowalniają rozwój zarodków.

Dlatego celem niniejszej pracy jest zbadanie wpływu koryfolitropiny alfa (Elonva) na morfokinetykę zarodków i wyniki leczenia płodności w porównaniu z grupą kontrolną stymulowaną folitropiną beta (Puregon). Badacze stawiają hipotezę, że istnieją różnice w zachowaniu morfokinetycznym zarodków w ramach różnych protokołów stymulacji.

Łącznie 742 zarodków pochodzących od 215 różnych pacjentek cierpiących na niepłodność poddawanych stymulacji jajników preparatem Elonva oraz łącznie 5148 zarodków pochodzących od 1136 pacjentek poddawanych stymulacji jajników preparatem Puregon zostanie poddanych retrospektywnej analizie. Aby wykluczyć czynniki środowiskowe, ocena będzie rozróżniać zarodki hodowane w atmosferze 21% tlenu i zarodki w warunkach obniżonej zawartości tlenu (5% tlenu) w embrioskopie. Grupy będą dopasowane wiekowo i BMI.

Wszystkie kobiety objęte badaniem przeszły sterowaną protokołem hiperstymulację jajników antagonistą GnRH (hormonu uwalniającego gonadotropinę). Pacjenci otrzymywali rekombinowany ludzki hormon folikulotropowy (Elonva; MSD Sharp & Dohme GMBH, Puregon; MSD Sharp & Dohme GMBH). ELONVA podawano przez 7 dni z późniejszym podaniem Puregon (MSD Sharp & Dohme GMBH) w przypadku dalszej potrzeby stymulacji. Preparat Puregon podawano przez 8-10 dni, dostosowując dawkowanie do wieku, masy ciała, stężenia hormonu antymullerowskiego (sAMH) w surowicy i stanu hormonalnego. USG przezpochwowe wykonywano po 5 dniach stymulacji, a następnie co drugi dzień do dnia pobrania komórki jajowej. Pomiar ultrasonograficzny przeprowadzono za pomocą dopochwowej sondy RIC 5-9-D 4D aparatu ultrasonograficznego GE Voluson E8 BT09 (obie firmy GE Healthcare Austria GmbH). Aby uniknąć przedwczesnej owulacji, wstrzyknięto antagonistę GnRH (Cetrotide, Merck KGaA). Wyzwalanie rozpoczęto 35 godzin przed pobraniem komórki jajowej, podawano podskórnie 5000-10 000 IU ludzkiej gonadotropiny kosmówkowej (hCG) (Pregnyl, N.V. Organon), z dostosowaniem dawkowania do masy ciała pacjenta.

Pęcherzyki o średnicy większej niż 10 mm aspirowano w sedacji (Propofol, Fresenius Kabi Austria GmbH; Rapifen, Janssen-Cilag Pharma GmbH) i pod kontrolą USG przezpochwowego (GE Healthcare Austria GmbH). Płyn pęcherzykowy (FF) badano pod kątem oocytów w stałej temperaturze 37°C w stacji roboczej IVF L24E ze stopniem ogrzewania (K-SYSTEMS Kivex Biotec A/S). Docytoplazmatyczne wstrzyknięcie plemnika (ICSI) wykonano na wszystkich oocytach metafazy II (MII) 4-5h po pobraniu oocytu zgodnie z naszą standardową procedurą operacyjną w obu grupach pacjentek.

Po pobraniu i zapłodnieniu oocytów hodowano je w uniwersalnej pożywce hodowlanej (Gynemed Medizinprodukte GmbH & Co. KG, Niemcy). Po 14-16 h wykonano kontrolę zapłodnienia. Wszystkie normalnie zapłodnione zarodki z dwoma przedjądrzami (PN) hodowano następnie na płytkach Embryoslide w inkubatorze poklatkowym Embryoscope® (oba Vitrolife AB, Szwecja). Dzięki wbudowanej kamerze i mikroskopowi zdjęcia rozwijającego się zarodka były wykonywane co 15 minut w siedmiu różnych warstwach. Definicję parametrów morfokinetycznych przeprowadzono zgodnie z kryteriami zaproponowanymi przez Ciray i in. i analizowano za pomocą oprogramowania opracowanego do analizy obrazów poklatkowych (oprogramowanie Embryoviewer®; Vitrolife AB, Szwecja).