Identifikace nových molekulárních cílů pro pacienty s revmatoidní artritidou

Obecným cílem je studium mechanismů disociace mezi zánětlivou aktivitou a destrukcí kloubů u pacientů s revmatoidní artritidou (RA) v remisi, ale vykazující progresi kostních erozí.

Primárním cílem je odhalit rozdíly mezi pacienty s AR v klinické remisi, ale vykazující progresivní kloubní erozi a pacienty v kompletní klinické a radiologické remisi, charakterizací proteinů, zejména chromograninu A (CHGA), přítomných na kloubní i systémové úrovni.

Sekundární cíle jsou: charakterizovat buněčný zánětlivý intraartikulární infiltrát a buňky imunitního systému přítomné v oběhu; charakterizovat proteinový profil buněk sídlících v synovii, chrupavce a kosti poškozeného kloubu. Předpokládá se, že tímto přístupem je možné detekovat proteinové nebo buněčné markery schopné včas identifikovat pacienty s rizikem progrese k erozi kloubu a identifikovat specifické buněčné a proteinové cíle pro vývoj lokální nebo systémové terapie vhodné pro kontrolu erozivní RA.

Jedná se o, observační s dodatečným postupem, soudní, prospektivní studii. 160 pacientů 80 pacientů s RA (skupina 1), z toho:

• Skupina 1A: nejméně 10 pacientů, maximálně 70, s RA v remisi, ale vykazující progresivní kostní erozi, kteří musí podstoupit chirurgický zákrok.
• Skupina 1B: minimálně 10 pacientů maximálně 70, s RA v remisi, bez kostní eroze Skupina 80 kontrol,
• Skupina 2: 10 pacientů s osteoartrózou (OA), kteří musí podstoupit chirurgický zákrok.
• Skupina 3:70 bez RA a OA, ale hospitalizováni pro jakoukoli jinou ortopedickou patologii, která musí podstoupit chirurgický zákrok.

Vzhledem k několika praktickým problémům (např. se může objevit nevhodnost nebo nízké množství biologického materiálu), předpokládáme možnost náboru dalších pacientů až do dosažení kompletních vzorků pro popsané skupiny.

Budou zařazeni muži a ženy pacienti s RA v klinické remisi nebo ne, pacienti s osteoartrózou a pacienti hospitalizovaní pro jakoukoli jinou ortopedickou patologii (použití jako kontroly). U pacientů s RA bude zaznamenávána farmakologická léčba, laboratorní data, aktivita RA, hodnocení kostních erozí pomocí rentgenu rukou a nohou.

Od pacientů s RA s kostní erozí, pacientů s OA a kontrol bude odebrána plná krev; od pacientů s RA bez kostní eroze bude odebrána plná krev. Z plné krve budou izolovány mononukleární buňky a odebrána plazma. Další zkumavka bude odebrána pro získání séra, aby se provedlo dávkování CHGA. Od pacientů s RA i OA bude odebírána synoviální tekutina spolu s mononukleárními buňkami přítomnými v této tekutině a od pacientů s RA i OA kandidátů na totální kloubní náhradu fragmenty synoviální membrány, chrupavky, kosti a kostní dřeně budou odebrány během operace jako odpadní materiál .

Jaderné buňky izolované z plné krve, synoviální tekutiny a kostní dřeně budou charakterizovány pomocí panelu markerů označených Human Immunology Project.

Proteinové čipy na vzorcích plazmy získaných od pacientů s RA, OA a kontrol budou provedeny k identifikaci panelu proteinů akutní fáze, cytokinů a chemokinů přítomných na systémových hladinách a ke zvýraznění analogií a rozdílů v profilu systémových proteinů.

Synoviální tekutina bude použita k identifikaci proteinů přítomných v synoviální tekutině pacientů s RA a OA. Hlavní identifikovaný cíl bude kvantifikován a použit jako markery progrese eroze, pro vývoj intraartikulárních farmakologických terapií a pro návrh terapeutických dávek léků. Stejný druh analýzy bude proveden i na tkáních získaných od chirurgických pacientů (pacienti s RA a OA), aby se stanovily zapojené dráhy a tkáňové specifické cíle, které mají být stimulovány, tj. pomocí trofických faktorů, aby se podpořila tkáňová homeostáza po vypnutí autoimunitní a zánětlivé procesy.

K dosažení tohoto cíle budou charakterizované proteinové profily funkčně hodnoceny pomocí technik systémové biologie založených na studiu interakčních sítí protein-protein (PPI) (8). Kromě toho budou proteinové profily zpracovány pomocí statistik (Pearson, Spearman) schopných vyhodnotit závislost mezi proměnnými a umožnit budování proteinových koexpresních sítí (9). V obou případech, PPI a/nebo koexpresních sítí, studium struktury sítí umožní identifikaci hub, úzkých míst a modulů (10) typických pro pacienty s RA s erozí nebo bez ní.

Sérum bude zasláno do IRCCS Ospedale San Raffaele pro kvantifikaci chromograninu A. Část buněk získaných z plné krve a synoviální tekutiny bude odeslána do IRCCS Ospedale pediatrico Bambino Gesù (Řím, Itálie) k další imunologické analýze.